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原文传递一种虎皮大承气汤的检测方法

专利名称：	一种虎皮大承气汤的检测方法
摘要：	本发明提供了一种虎皮大承气汤的检测方法，它是采用HPLC‑MS/MS检测，其操作步骤如下：1)对照品溶液的制备；2)供试品溶液的制备；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪。本发明检测方法，各色谱峰之间的分离度高，相互之间无干扰，可以同时实现对大黄素、香草酸、橙皮苷、虎杖苷和厚朴酚的准确检测，且操作简便，容易控制，检测成本低，检测结果准确可靠，为虎皮大承气汤及其灌肠后在体内药动学提供了一种行之有效的检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	四川大学华西医院
发明人：	万美华;陈欢;向谨;唐文富
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910556137.8
公开号：	CN110243965A
代理机构：	成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	李高峡;张娟
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	610000 四川省成都市武侯区国学巷37号
主权项：	1.一种虎皮大承气汤的检测方法，其特征在于：它是采用HPLC-MS/MS检测，其操作步骤如下： 1)制备对照品溶液：分别取虎杖苷，大黄素，橙皮苷，厚朴酚和香草酸，加甲醇溶解，即得； 2)制备供试品溶液：取待测样品，加65％甲醇提取，离心，过滤，取滤液，即得； 3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱质谱联用仪进行分析：色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱程序：质谱条件如下：离子化模式，电喷雾离子源；检测方式：负离子扫描；扫描模式：多反应检测扫描。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)所述对照品溶液中每1mL含大黄素0.98mg、香草酸0.97mg、橙皮苷0.98mg、虎杖苷0.98mg、厚朴酚0.98mg。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述待测样品为虎杖、大黄、瓜蒌皮、厚朴、芒硝和枳实组成的虎皮大承气汤的配方原料药或配方制剂；所述虎杖、大黄、瓜蒌皮、厚朴、芒硝和枳实的质量比为：15：12：15：15：9：12。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述待测样品和65％甲醇的质量体积比为78g：50ml。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述提取为超声提取，时间2h；所述离心速度12000rpm，时间5min；所述过滤是用0.45μm Millipore滤纸过滤。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤3)所述色谱条件中流速0.4mL/min，柱温30℃；进样量50μL。 7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤3)所述质谱条件中，喷雾电压:5500V，毛细管温度：500℃，毛细管压力：60v，碰撞气体：氩气，离子驻留时间0.10s，虎杖苷碰撞能量-22eV，大黄素碰撞能量-48eV，橙皮苷碰撞能量-35eV，厚朴酚碰撞能量-42eV，香草酸碰撞能量-27eV。 8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述虎杖苷母离子质荷质比389.1，子离子质荷比227.1，大黄素母离子质荷比269.1，子离子质荷比240.1，橙皮苷母离子质荷比609.2，子离子质荷比301.2，厚朴酚母离子质荷比265.1，子离子质荷比245.1，香草酸母离子质荷比167.0，子离子质荷比108.0。 9.一种虎皮大承气汤的在体药动学检测方法，其特征在于：它的操作步骤如下： a、取血样或组织离心，取上清液，依次加盐酸、内标物质和乙酸乙酯混匀，离心，取上清液水浴蒸干，残渣加乙腈水溶液复溶，作为供试品溶液； b、按照权利要求1所述方法检测。 10.根据权利要求9所述检测方法，其特征在于：步骤a)所述血样离心速度3500r/min，时间30min；所述组织离心是取组织，加9倍量(v/ml,μL/mg)生理盐水，匀浆，10000r/min离心10min。 11.根据权利要求9所述检测方法，其特征在于：步骤a)所述血样或组织上清液、盐酸、内标物质和乙酸乙酯的体积比为0.2ml：0.05mL：1mL：1mL；所述混匀后离心的温度为4℃，时间5min，转速：13000rpm。 12.根据权利要求9或11所述的检测方法，其特征在于：所述内标物质是50％甲醇。 13.根据权利要求9所述检测方法，其特征在于：步骤a)所述水浴温度45℃；所述乙腈水溶液体积100μL；所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比3：7。 14.根据权利要求9所述检测方法，其特征在于：步骤b)所述方法中对照品溶液中还需加入空白血浆；所述对照品溶液与空白血浆的体积比为1:200。 15.根据权利要求14所述检测方法，其特征在于：所述空白血浆是没有喂食过任何药物的血浆，按照步骤a所述方法处理得到的溶液。
所属类别：	发明专利