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原文传递一种血清中含硫氨基酸的检测方法及其富集材料

专利名称：	一种血清中含硫氨基酸的检测方法及其富集材料
摘要：	本发明涉及一种血清中含硫氨基酸的检测方法及其富集材料，包括如下步骤：血清样品加入还原剂还原，还原后的血清样品溶液经过特异性净化材料前处理，得到净化的样品洗脱溶液，进液相色谱‑串联质谱检测分析，测定蛋氨酸、半胱氨酸和同型半胱氨酸等含硫氨基酸的检测方法。特异性材料是以硅胶为基质的金属亲和材料，血清经过特异性材料净化，可以去除血清中基质的干扰，提高含硫氨基酸灵敏度，更好的保证含硫氨基酸检测的准确度。特异性材料的净化是利用含硫氨基酸的巯基与金属之间特异性的亲和作用，来实现对含硫氨基酸的选择性富集，解决含硫氨基酸在反相色谱无法有效富集的过程。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	大连润生康泰医学检验实验室有限公司
发明人：	曹云峰;孙晓宇;潘永强;王爽;洪沫;孙冬雪;宋丹;许晶
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201910644151.3
公开号：	CN110274973A
代理机构：	北京中和立达知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	杨磊
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	116000 辽宁省大连市甘井子区金龙寺路300-8号3层
主权项：	1.一种血清中含硫氨基酸的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 1)血清样本还原：取血清样本加入氘代内标，涡旋混合，加入还原剂还原，涡旋混合反应一段时间得到血清样品溶液，备用； 2)装填固相萃取柱：装填规格：固相萃取材料50-500mg，柱管体积1-6mL； 3)固相萃取分离：对所述萃取柱进行活化，平衡，上样，淋洗，洗脱，最后收集全部洗脱流份； 4)样品的分析：将步骤3)收集的洗脱流份，氮气吹干，用初始流动相复溶，采用基于亲水作用反相色谱原理的高效液相进行组分分离，三重四极杆串联质谱检测，得到样品谱图，检测得到含硫氨基酸的正离子。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含硫氨基酸为蛋氨酸、半胱氨酸和同型半胱氨酸。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1)中，血清样本取样的体积为5μL-500μL；每1μL血清样本加入含硫氨基酸氘代内标0.1μL-10μL，含硫氨基酸氘代内标加入的浓度为1μM-50μM；还原剂为二硫苏糖醇，所述还原剂的浓度为0.5g/L(w/v)-10g/L(w/v)。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述固相萃取材料是对含硫氨基酸的特异性净化材料，所述特异性净化材料以硅胶为基质，键合相为配体L和金属离子M，其结构为：其中，M为Fe3+、Cu2+、Co2+、Ni2+中的一种，L为组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸中的一种，n等于8-30；固相萃取材料硅胶颗粒度为15μm-100μm，孔径为比表面积150m2/g-400m2/g。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述特异性净化材料的结构中，M为Co2+，L为赖氨酸，n等于18，固相萃取材料硅胶颗粒度为50μm，孔径为比表面积300m2/g。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤3)中，固相萃取柱先采用体积比有机溶剂：水＝70：30第一混合液进行洗涤；有机溶剂进行活化；再加入体积比有机溶剂：水＝5：95第二混合液平衡；血清样品溶液上样后；加入第二混合液进行淋洗；最后用体积比有机溶剂：水：碱＝50：49.9：0.1第三混合液洗脱，收集全部的洗脱流份。 7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述的第一混合液、第二混合液、第三混合液中的有机溶剂及缓冲盐碱溶液是相对应的，所述的有机溶剂为甲醇、乙腈、异丙醇、乙醇、丙酮中的一种或几种，所述的缓冲盐碱溶液为氨水或乙二胺溶液，碱浓度0.1-5％。 8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤4)中的高效液相色谱条件：色谱柱：CORTECS 2.7μm 2.1μm×100mm；流动相流速0.3mL/min；梯度洗脱；柱温30-45℃；进样量：5uL；质谱分析条件：离子化模式：ESI+；喷雾电压：4.0KV；脱溶剂气温度：450℃；雾化气：50psi；辅助雾化气：50psi；气帘气：30；扫描方式：多反应监测(MRM)。 9.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，蛋氨酸、半胱氨酸和同型半胱氨酸的检出限为1.2μg/mL-6μg/mL。
所属类别：	发明专利