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原文传递一种血清中肾上腺素类物质的检测方法及其富集材料

专利名称：	一种血清中肾上腺素类物质的检测方法及其富集材料
摘要：	本发明涉及一种血清中肾上腺素类物质的检测方法和富集方法，所述方法包括以下步骤：含肾上腺素类的样品按一定比例有机溶剂提取或溶解后，然后采用根据肾上腺素类物质中的氨基结构，设计出疏水性较强的硅胶表面键合直链烷基，苯磺酸基团或磺酸基团键合相填料中；通过优化制备过程中溶剂用法用量及淋洗配比等参数，使富集得到的产物进入已优化好方法的超高效液相色谱串联质谱检测，达到对肾上腺素类物质的富集和特异性高灵敏度检测的目的；富集后的肾上腺素样本能够在一定的色谱条件下，实现快速、准确定量分析，本方法的回收率在91.2％‑104.7％，相对标准偏差均小于5.9％。本发明操作过程简单，同时采用超高效液相色谱串联质谱，具有特异性高、稳定性好、回收率高、定量准确、高通量等特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	大连润生康泰医学检验实验室有限公司
发明人：	曹云峰;孙晓宇;曹冉;刘明莉;崔丽;高鹏;房中则;赵福荣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201910644152.8
公开号：	CN110274974A
代理机构：	北京中和立达知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	杨磊
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	116000 辽宁省大连市甘井子区金龙寺路300-8号3层
主权项：	1.一种血清中肾上腺素类物质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤， (1)将样品置于离心管底部，加入内标提取液涡旋提取；涡旋混合30秒后，再超声3min，所述内标为肾上腺素同位素，内标浓度范围为10-500umol/L； (2)装填固相萃取柱：填料装填规格为50-500mg/1-6mL固相萃取柱； (3)富集肾上腺素样品：对所述固相萃取柱进行活化，平衡，上样，淋洗，洗脱，最后收集所有洗脱液； (4)样品的分析：将步骤3)收集的洗脱液装入进样小瓶中，将其进入超高效液相色谱串联质谱检测血清中的肾上腺素类物质。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)包括以下步骤： 1)配置样品内标提取液试剂内标提取液为有机溶剂∶将同位素内标物质溶于100mM缓冲盐溶液，其中有机溶剂和缓冲盐溶液两者体积比介于70∶30—90∶10之间；有机溶剂为甲醇，乙醇，乙腈，丙酮中的任意一种或多种组合；所采用的缓冲盐溶液为甲酸铵或乙酸铵中的一种或两者组合，调剂缓冲盐用的酸为甲酸或乙酸中的一种或两者组合； 2)样本提取移取5-500uL血清样品到1.5mLEP管底部，加入0.5-50ul内标提取液涡旋提取；涡旋混合30秒后，再超声3min，备用。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述样品与内标提取液的体积比为10：1。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，采用硅胶为载体、表面键合直链烷基连接的阴离子基团的填料，所述阴离子基团为磺酸基团和苯磺酸基团中的一种或多种，烷基碳链长度n＝3～15；结构如下：键合相填料的粒径为5-100um，孔径60-300nm，比表面积50-800㎡/g。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)的操作步骤为：先采用有机溶剂：水的第一混合液对固相萃取柱进行活化；再加入体积比有机溶剂∶100mM缓冲盐溶液：水＝90:5:5的第二混合液进行平衡；将全部上清液样品上样后，加入第一和二混合液进行淋洗；最后用体积比有机溶剂∶100mM缓冲盐溶液：水：酸或碱＝90:2:7:1的第三混合液进行洗脱；所述的第一、二种溶剂的有机溶剂及缓冲盐溶液是相对应的，缓冲盐为甲酸铵或乙酸铵，溶剂为水、甲醇、乙醇、乙腈、丙酮中的一种或多种组成，第三种洗脱液为强洗脱溶剂，主要由水、甲醇、乙醇、乙腈、盐酸、氨水、甲酸铵、乙酸铵；所述上清液中样品质量占固相萃取柱中填料质量的0.5％-10％。 6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，步骤(3)的具体操作步骤为：加入3mLMeOH∶H2O(10∶90v/v)活化后，再加入3mL MeOH∶NH4FA∶H2O(90∶5∶5，v/v/v)进行平衡，然后将上样溶液全部上样后，加入1mL MeOH∶NH4FA∶H2O(90∶5∶5，v/v/v)和1mL MeOH∶H2O(10∶90，v/v)淋洗；最后加入500uLMeOH∶NH4FA∶H2O∶HCl(90:2:7:1，v/v/v/v)洗脱，并收集所有的洗脱；其中，平衡、活化、上样、淋洗、洗脱所使用的有机溶剂、缓冲盐溶液和酸需一一对应。 7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述的第一混合液、第二混合液、第三混合液中的有机溶剂及碱溶液是相对应的，所述的有机溶剂为甲醇、乙腈、异丙醇、乙醇、丙酮中的一种或几种，所述的缓冲盐溶液为氨水或乙二胺溶液，碱浓度0.1-5％。 8.根据权利要求1所述的检测方法，步骤(4)中的超高效液相色谱条件：色谱柱：Waters T3，100mm×2.1mm，1.7μm；流动相A：甲醇-10mM甲酸铵B：水-10mM甲酸铵；流动相流速：0.3mL/min；梯度洗脱；柱温：30-45℃；进样量：2μL所述的梯度洗脱，条件为；时间(min) 流速(ml/min) A％ B％ 0 0.3 10 90 0.5 0.3 95 5 2.5 0.3 95 5 2.6 0.3 10 90 4 0.3 10 90 质谱分析条件：离子化模式：ESI+；喷雾电压：5.5kV；脱溶剂气温度：500℃；雾化气(GS1)：55psi；辅助雾化气(GS 2)：55psi；气帘气：45psi；碰撞气：10psi；扫描方式：多反应监测(MRM)。
所属类别：	发明专利