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原文传递一种基于铁蛋白三维结构免疫传感器的制备方法及应用

专利名称：	一种基于铁蛋白三维结构免疫传感器的制备方法及应用
摘要：	本发明涉及一种基于铁蛋白三维结构免疫传感器的制备方法及应用，属于新型纳米材料领域与生物传感技术领域；本发明利用电致化学发光ECL技术，以铁蛋白作为基底，在其外部共价交联ECL发光分子N‑(4‑氨丁基)‑N‑乙基异鲁米诺分子得到异鲁米诺‑铁蛋白，通过调控反应条件，在异鲁米诺‑铁蛋白表面原位还原纳米金，得到一种新颖的三维杂化纳米结构异鲁米诺‑铁蛋白‑纳米金，并基于该结构提出了一种免疫传感器的制备方法，该方法具有制备简单、成本低、反应能耗低、绿色环保的优点，将传感器用于降钙素原的检测，具有灵敏度高、特异性强、重现性好的优点，其检出限为3.4 fg/mL，线性范围10 fg/mL‑50 ng/mL，在降钙素原的临床检测中有着明显的潜在应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	魏琴;杨磊;冯锐;刘蕾;刘雪静;魏东;闫涛
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-13T00:00:00+0800
申请号：	CN201910524532.8
公开号：	CN110231335A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	李茜
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种基于铁蛋白三维结构免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：（1）将直径为4 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝抛光粉抛光处理，用超纯水冲洗干净；（2）在玻碳电极表面滴涂6 μL、浓度为2 ~ 4 mg/mL的抗体标记的异鲁米诺-铁蛋白-纳米金溶液作为传感器基底材料，将其置于37 °C晾干；（3）滴加3 μL、质量分数为1 ~ 3%的牛血清白蛋白溶液，以封闭电极表面的非特异性活性位点，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液PBS冲洗电极表面，将其置于4 °C晾干；（4）滴加6 μL 降钙素原的标准溶液或未知浓度的降钙素原溶液，37 °C下孵化0.5 ~ 2h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液PBS冲洗电极表面，将其置于4 °C晾干，传感器构建完毕。 2.如权利要求1所述的一种基于铁蛋白三维结构免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，所述抗体标记的异鲁米诺-铁蛋白-纳米金溶液，通过以下步骤制备：将3 ~ 5 mL、浓度为5 μg/mL的铁蛋白溶液与0.5 ~ 2.5 mL、浓度为10 mmol/L的N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺溶液混合，随后加入3.5 ~ 5.5 mL去离子水进行稀释，然后，向上述混合溶液中加入50 ~ 150 uL、质量分数50%的戊二醛溶液，持续搅拌2 h后得到浅黄色的异鲁米诺-铁蛋白溶液，向混合溶液中加入100 ~ 300 μL、浓度为10 mmol/L的氯金酸溶液并继续搅拌15 min，然后将该混合溶液置于40 ~ 60 oC水浴中5 min，直至溶液颜色由浅黄色变为淡紫色，得到异鲁米诺-铁蛋白-纳米金溶液；在上述溶液中，加入100 ~ 300 μL、浓度为10 mg/mL的降钙素原抗体溶液，在4 °C下振荡孵化6 ~ 18 h，离心后分散到1 mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中得到抗体标记的异鲁米诺-铁蛋白-纳米金溶液，置于4 °C下储存备用。 3.如权利要求1所述的制备方法制备的免疫传感器用于降钙素原浓度的检测。 4.如权利要求4所述的降钙素原浓度的检测，其特征在于，操作步骤如下：（1）参数设置：超微弱电致化学发光仪的光电倍增管高压设置为800 V，电化学工作站循环伏安扫描电位范围设置为0 ~ 0.6 V，扫描速率设置为0.1 V/s；（2）测试：以银/氯化银电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，以上述方法制备的传感器为工作电极，在10 mL含35 ~ 65 mmol/ 过氧化氢的磷酸盐缓冲溶液中进行电致化学发光测试，得到孵化不同浓度降钙素原时对应的电致化学发光信号强度，绘制工作曲线，其检出限为3.4 fg/mL，线性范围10 fg/mL-50 ng/mL；（3）将孵化未知浓度的降钙素原实际样品的电致化学发光传感器进行测试得到相应的信号强度，据此根据工作曲线计算即可得到该试剂样品中的降钙素原浓度。
所属类别：	发明专利