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原文传递双模态纳米探针的制备及其对间充质干细胞的标记及成像

专利名称：	双模态纳米探针的制备及其对间充质干细胞的标记及成像
摘要：	本发明涉及生物技术领域，双模态纳米探针合成的方法，将介孔二氧化硅煅烧成二氧化硅细粉末，将Gd(NO3)3·6H2O溶解在去离子水中形成Gd(NO3)3溶液，然后将Gd(NO3)3溶液逐滴加入到二氧化硅细粉末中，滴加过程进行搅拌，然后干燥和煅烧，获得Gd@SiO2复合物；本发明方法制备AIE‑Gd@SiO2纳米复合物，具有良好的生物相容性和低毒性，可以作为纳米探针标记间充质干细胞，同时可以实现荧光和核磁双模态成像，应用于干细胞的实验研究。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山西;14
申请人：	山西医科大学
发明人：	张宏;田梅;张冰;程艳;王静
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-13T00:00:00+0800
申请号：	CN201910342243.6
公开号：	CN110231316A
代理机构：	太原市科瑞达专利代理有限公司
代理人：	李富元
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	030002 山西省太原市新建南路56号
主权项：	1.一种双模态纳米探针制备的方法，其特征在于：按照如下步骤进行步骤一、将介孔二氧化硅煅烧成二氧化硅细粉末，将Gd(NO3)3·6H2O溶解在去离子水中形成Gd(NO3)3溶液，然后将Gd(NO3)3溶液逐滴加入到二氧化硅细粉末中，滴加过程进行搅拌，然后干燥和煅烧，获得Gd@SiO2复合物；步骤二、将聚集诱导发光AIE荧光染料溶解在乙腈溶液中形成AIE溶液，然后将AIE溶液逐滴滴加到Gd@SiO2复合物中，搅拌混合均匀后进行干燥，然后加入到聚乙烯吡咯烷酮和乙二醇的混合溶液中，搅拌均匀后再加入质量百分比浓度为25%的氨水，然后再加入乙醇和正硅酸乙酯，最后用乙腈进行清洗以除去表面未结合的AIE染料，将沉淀物进行干燥，获得AIE-Gd@SiO2纳米复合物即为双模态纳米探针。 2.根据权利要求1所述的双模态纳米探针制备的方法，其特征在于：步骤一中，介孔二氧化硅的量为0.1-1克，煅烧后形成的二氧化硅细粉末的量为0.06-0.6克，Gd(NO3)3·6H2O的质量为0.06-0.6克，Gd(NO3)3溶液的浓度为0.4-4摩尔/升。 3.根据权利要求1所述的双模态纳米探针制备的方法，其特征在于：步骤二中，将0.02-0.2克的聚集诱导发光AIE荧光染料溶解在300-2000微升的乙腈溶液中形成AIE溶液，然后将AIE溶液逐滴滴加到0.08-0.7克Gd@SiO2复合物中，然后加入到0.25-2.5克聚乙烯吡咯烷酮和25ml乙二醇的混合溶液中，搅拌均匀后再加入2.5-25ml的质量百分比浓度为25%的氨水，然后再加入1.25-12.5ml乙醇和25-250ul正硅酸乙酯。 4.利用双模态纳米探针标记干细胞，其特征在于：首先用去离子水超声配置浓度为1mg/ml的AIE-Gd@SiO2纳米复合物水溶液，之后用培养基将纳米复合物水溶液稀释成不同的浓度，随之将不同浓度的AIE-Gd@SiO2纳米复合物分别与间充质干细胞在培养箱中孵育24h，随后用磷酸缓冲溶液清洗三次除去未被吞噬的AIE-Gd@SiO2纳米复合物，随后加入含有噻唑蓝MTT溶液的培养基继续培养4h，加入二甲亚砜溶液低速振荡10min，用酶标仪在490nm的波长下测各培养孔的吸光值；对于细胞增殖实验，孵育24h清洗后继续培养5d，同上所述的方法测吸光度，以此来测细胞毒性。 5.根据权利要求4所述的利用双模态纳米探针标记干细胞，其特征在于：不同浓度的AIE-Gd@SiO2纳米复合物分别是5微克/毫升、10微克/毫升、20微克/毫升、40微克/毫升、80微克/毫升，噻唑蓝的量为0.25g，浓度为5mg/ml；磷酸缓冲液的量为5-15毫升，pH为7.4；二甲亚砜的量为150-5300ul。 6.双模态纳米探针标记干细胞进行荧光和核磁双模态成像，其特征在于：将不同浓度的AIE-Gd@SiO2纳米材料与干细胞同样孵育24h后，清洗，固定，置于激光共聚焦显微镜下观察其荧光成像；对于核磁成像，将细胞与不同浓度的纳米复合物孵育24h后，重组胰酶消化离心后悬于磷酸缓冲溶液和琼脂糖溶液混合的PCR管中，通过核磁成像来观察纳米复合物标记的干细胞在琼脂糖溶液中的磁信号强弱。 7.根据权利要求6所述的双模态纳米探针标记干细胞进行荧光和核磁双模态成像，其特征在于：不同浓度的AIE-Gd@SiO2纳米材料是指5微克/毫升、10微克/毫升、20微克/毫升、40微克/毫升、80微克/毫升，磷酸缓冲溶液为50-500微升，琼脂糖的量为0.05g，质量分数为1%，体积为50-500微升。
所属类别：	发明专利