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原文传递用于物质检测的组合物及其在间充质干细胞中的应用

专利名称：	用于物质检测的组合物及其在间充质干细胞中的应用
摘要：	一种用于电化学检测的组合物，整合了电极的导电性特性与银纳米簇的电化学性质，通过抗体的免疫识别引入滚环扩增技术以及银纳米簇实现输出信号的放大，使得检测灵敏度高，特异性强，因而在临床诊断等领域(如：间充质干细胞)有广泛的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	章毅
发明人：	章毅;赵婧;伍婷;曹亚;朱小立
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201910125550.9
公开号：	CN109856213A
代理机构：	上海市海华永泰律师事务所
代理人：	包文超
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	200051 上海市长宁区虹桥路1191号9楼
主权项：	1.一种组合物，其特征在于包括： DNA链，其包括序列5′-TCAGAACTCACCTGTTAGCCCACCCAC-3′的多聚核苷酸单链；金属银，其附着于DNA链，形成DNA-AgNCs；第一抗体，其结合于电极上；第二抗体，其与包含序列为5′-SH-TCACAGCTGAGGATAGGACAT-3′的多聚核苷酸链交联； DNA环状模板，多聚核苷酸链包含序列5′-p-CTCAGCGTGTAACAACATGAAGATTGTAGGTCAGAACTCACCTGTTAGAAACTGTGAAGATCGCTTATTATGTCCTATC-3′； T4连接酶， T4缓冲液， DNA聚合酶，以及 dNTP。 2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述的第一抗体包含CD44抗体。 3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述的第二抗体包含CD90抗体。 4.根据权利要求1所述的组合物在检测间充质干细胞中的应用。 5.一种间充质干细胞的检测方法，其特征在于包括：先将包含待测的间充质干细胞的样品溶液与具有第一抗体的电极相互作用，使得间充质干细胞在电极表面的捕获；然后，将所得到的捕获有间充质干细胞的电极与第二抗体共混，使得第二抗体与间充质干细胞的识别结合；接着，使用T4连接酶，T4缓冲液，DNA环状模板、DNA聚合酶和dNTP进行滚环扩增，得到滚环扩增产物与DNA-AgNCs混合反应，使得DNA-AgNCs附着于电极上；最后，将连接了DNA-AgNCs的电极置于含有1～1.5M的KCl的磷酸缓冲盐溶液，用线性扫描伏安法进行电化学表征，采集电化学信号；所述的第一抗体包含CD44抗体；所述的第二抗体系CD90与序列为5′-SH-TCACAGCTGAGGATAGGACAT-3′的多聚核苷酸链交联的复合物。 6.一种间充质干细胞的检测方法，其特征在于包括：先将包含待测的间充质干细胞的样品溶液与具有第一抗体的电极相互作用；反应时间为1～2小时，反应温度为30～40℃，使得间充质干细胞在电极表面的捕获；然后，将所得到的捕获有间充质干细胞的电极与第二抗体共混，于30～40℃反应1～2小时，使得第二抗体与间充质干细胞的识别结合；接着，分别取T4连接酶，T4缓冲液，DNA环状模板以及固定了间充质干细胞的电极于30～40℃共反应1～2小时；加入BSA、DNA聚合酶Phi29、Phi29缓冲液和dNTP反应2～3小时，反应温度为30℃，得到的滚环扩增产物，再与DNA-AgNCs混合反应2～3小时，反应温度为30～40℃；最后，将连接了DNA-AgNCs的电极置于含有1～1.5M KC1的PBS，用线性扫描伏安法进行电化学表征，采集电化学信号；所述的第一抗体包含CD44抗体；所述的第二抗体系CD90与序列为5′-SH-TCACAGCTGAGGATAGGACAT-3′的多聚核苷酸链交联的复合物。
所属类别：	发明专利