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原文传递用于适配色谱系统中的UV池路径长度的方法

专利名称：	用于适配色谱系统中的UV池路径长度的方法
摘要：	本发明涉及用于确定色谱柱（1；39，47，59；107、109、111、113）的操作状态的方法，其包括：检测进料信号（21；201），该进料信号表示向柱的入口提供的进料材料的成分；检测进料材料中的UV吸收度；检测流出物信号（23；203、205、207、209），其表示来自柱的流出物的成分；以及使用该进料信号和该流出物信号来确定柱的操作状态。使用在第一UV波长操作的具有第一UV池路径长度的第一UV检测器来生成进料信号，并且使用在第二UV波长操作的具有第二UV池路径长度的第二UV检测器来生成流出物信号。方法进一步包括基于进料材料中所检测的UV吸收度来确定第一阈值，并且基于该第一阈值选择第一UV池路径长度和/或第一UV波长。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	瑞典;SE
申请人：	通用电气健康护理生物科学股份公司
发明人：	H.布洛姆;M.贝格;H.埃林;L.马蒂亚森;H.斯科格拉尔;R.赫梅洛夫斯基
专利状态：	有效
申请日期：	2018-02-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201880012907.6
公开号：	CN110291393A
代理机构：	中国专利代理(香港)有限公司
代理人：	付曼;杨美灵
分类号：	G01N30/42(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	瑞典乌普萨拉
主权项：	1.一种用于确定色谱柱（1；39、47、59；107、109、111、113）的操作状态的方法，包括： -检测进料信号（21；201），所述进料信号（21；201）表示向所述柱的入口提供的进料材料的成分； -检测所述进料材料中的UV吸收度， -检测流出物信号（23；203、205、207、209），所述流出物信号（23；203、205、207、209）表示来自所述柱的所述流出物的成分； -使用所述进料信号和所述流出物信号来确定所述柱的操作状态，其中使用在第一UV波长操作的具有第一UV池路径长度的第一UV检测器来生成所述进料信号，并且使用在第二UV波长操作的具有第二UV池路径长度的第二UV检测器来生成所述流出物信号，所述方法进一步包括： -基于所述进料材料中所检测的UV吸收度来确定第一阈值，以及 -基于所述第一阈值来选择所述第一UV池路径长度和/或第一波长。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述色谱工艺期间连续确定所述柱（1；39、47、59；107、109、111、113）的所述操作状态。 3.如前述权利要求中的任一项所述的方法，进一步包括： -使用所述进料信号（21；201）和所述流出物信号（23；203、205、207、209）来确定差量信号和最大差量信号（27），所述差量信号是所述进料信号减去所述流出物信号，所述最大差量信号（27）是当所述流出物信号由于大致所有非结合组分已经经过所述柱的这一事实而显示平稳期（25）时所述进料信号减去所述流出物信号。 4.如权利要求3所述的方法包括当确定所述差量信号和所述最大差量信号时补偿时间延迟，所述时间延迟表示非结合组分经过所述柱所花的时间。 5.如权利要求3或4所述的方法，包括使用所述差量信号来确定所述柱的穿透点（c）和/或饱和点（d），所述穿透点和饱和点计算为所述最大差量信号（27）的相应的某一预定义百分比。 6.如前述权利要求中的任一项所述的方法，包括检测来自周期逆流PCC系统中的每个色谱柱（39、47、59；107、109、111、113）的流出物信号（203、205、207、209），以及使用这些流出物信号连同所述进料信号（201）以在所述色谱工艺期间连续确定所述PCC系统的不同色谱柱（39、47、59；107、109、111、113）的操作状态。 7.如前述权利要求中的任一项所述的方法，其中所述进料材料包括： -杂质，所述杂质当在所述第一UV检测器中测得时得出背景吸收度，以及 -产物，所述产物当在所述第一UV检测器中测得时得出所述进料材料中所述产物的吸收度水平，其中所述产物的所述吸收度水平是所述进料材料的所述背景吸收度的至少百分之四十。 8.如权利要求7所述的方法，其中所述进料材料中所述产物的所述吸收度水平高于所述背景吸收度。 9.如权利要求8所述的方法，其中所述进料材料中所述产物的所述吸收度水平是所述第一UV检测器中测得的所述吸收度的70%-90%。 10.如前述权利要求中的任一项所述的方法，其中选择所述第一UV池路径长度的步骤包括： -从多个预选UV池路径长度选择固定UV池路径长度，或者 -调整所述UV池路径长度。 11.如前述权利要求中的任一项所述的方法，其中选择所述第一UV波长的步骤包括调整所述第一UV波长。 12.如权利要求10或11所述的方法，其中执行选择所述第一UV池路径长度和/或第一UV波长的所述步骤直到所述第一UV检测器在线性检测范围内。 13.如前述权利要求中的任一项所述的方法，其中确定所述第一阈值的步骤包括： -估计进料材料中的最大UV吸收度，以及 -选择所述第一阈值来确保所述进料材料中所估计的最大UV吸收度在所述第一UV检测器中可检测。 14.如权利要求13所述的方法，其中所述方法进一步包括计算所述进料材料的UV吸收度，并且估计最大UV吸收度的步骤基于所计算的UV吸收度。 15.如权利要求13或14所述的方法，其中所述方法进一步包括测量所述进料材料的所述UV吸收度，并且估计最大UV吸收度的步骤基于所测得的UV吸收度。 16.如权利要求15所述的方法，其中所述方法进一步包括连续测量所述进料材料的所述UV吸收度，并且基于UV吸收度中的改变来选择所述第一阈值。 17.如权利要求16所述的方法，其中当UV吸收度中的所述改变与所述第一阈值相比超过预定百分比时执行选择所述第一阈值的步骤，所述预定百分比是1%、2%、5%、10%、15%或20%。 18.如前述权利要求中的任一项所述的方法，所述方法包括检测所述流出物中的所述UV吸收度，其中所述方法进一步包括： -基于所述流出物中所检测的UV吸收度和/或所述第一阈值来确定第二阈值，以及 -基于所述第二阈值来选择所述第二UV池路径长度和/或第二UV波长。 19.如权利要求18所述的方法，其中所述第二阈值低于或等于所述第一阈值。 20.如权利要求18或19所述的方法，其中确定所述第二阈值的步骤包括： -估计对于所述流出物中所选穿透点的UV吸收度，以及 -选择所述第二阈值来确保对于所选穿透点的所估计的UV吸收度在所述第二UV检测器中可检测。 21.如权利要求20所述的方法，其中所述方法进一步包括计算对于所选穿透点的UV吸收度，并且估计对于所述流出物中所选穿透点的UV吸收度的步骤基于对于所选穿透点的所计算的UV吸收度。 22.如权利要求20或21所述的方法，其中所述方法进一步包括测量所述流出物中的所述UV吸收度，并且估计对于所选穿透点的UV吸收度的所述步骤基于所测得的UV吸收度。 23.如权利要求18-22中的任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括选择等于所述第一UV池路径长度的所述第二UV池路径长度。 24.如权利要求18-23中的任一项所述的方法，其中选择所述第二UV池路径长度的所述步骤包括： -从多个预选UV池路径长度选择固定UV池路径长度，或者 -调整所述UV池路径长度。 25.如权利要求18-24中的任一项所述的方法，其中选择所述第二UV波长的步骤包括调整所述第二UV波长。 26.如权利要求24或25所述的方法，其中执行选择所述第二UV池路径长度和/或第二UV波长的所述步骤直到所述第二UV检测器在线性检测范围内。 27.如权利要求23或26所述的方法，其中所述方法进一步包括： -当所述第一UV池路径长度和/或第一UV波长改变时，在所述第二UV池路径长度和/或UV波长改变之前施加对应于所述柱中的驻留时间的时间延迟。 28.一种用于控制色谱系统的方法，所述色谱系统包括至少一个柱（1；39，47，59；107，109，111，113），所述方法包括以下步骤： -根据权利要求1-27中的任一项确定所述至少一个色谱柱的操作状态；以及 -根据所确定的操作状态控制不同的色谱工艺步骤的开始和停止。 29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，在所述色谱工艺期间连续确定所述操作状态并且根据所确定的操作状态实时控制所述不同的色谱工艺步骤的所述开始和停止。 30.一种用于控制周期逆流色谱系统的方法，所述周期逆流色谱系统包括至少两个柱（39、47、59；107、109、111、113），所述方法包括以下步骤： -检测进料信号（201），所述进料信号（201）表示向所述柱的入口提供的进料材料的成分； -检测流出物信号（203、205、207、209），所述流出物信号（203、205、207、209）表示来自所述系统中的每个柱的流出物的成分； -根据权利要求1-27中的任一项确定每个色谱柱的操作状态； -取决于所确定的操作状态，控制到所述柱以及所述柱之间的所述进料。 31.如权利要求30所述的方法，其特征在于，在所述色谱工艺期间连续确定所述操作状态并且取决于所确定的操作状态实时控制到所述柱以及所述柱之间的所述进料。 32.如权利要求30或31所述的方法，包括：取决于所确定的操作状态，控制对于所述进料和缓冲泵（31、37；101、103、105）的流率。 33.如权利要求30-32中任一项所述的方法，包括：通过根据所确定的操作状态调整不同的柱应该在加载区中多久以及在哪个位置来补偿不同的柱性质和/或流率中的任何差异。 34.一种将蛋白质与已收获的细胞培养液（HCCF）分离的方法，所述方法包括将所述HCCF馈送到包括至少两个柱的连续色谱系统，所述系统包括在所述柱上游的第一UV检测器和在接收所述HCCF的所述柱下游的第二UV检测器，并且其中所述系统布置成比较所述第一和第二UV传感器记录的UV信号来提供指示通过所述柱的蛋白质的穿透的差量UV响应，每个UV检测器在UV波长操作具有UV路径长度，并且所述系统布置成：当差量UV信号达到预定穿透点时将所述HCCF的馈送切换到不同的柱，其中所述UV检测器的所述路径长度在0.05-2mm的范围内，当所述UV波长在280-300的范围内时所述穿透点在5-90% 差量UV响应的范围内，并且所述HCCF中所述蛋白质的浓度多达41g/L。 35.如权利要求34所述的方法，其中所述蛋白质选为单克隆抗体。 36.如权利要求35所述的方法，其中所述方法包括：当HCCF的初始信号大于3.0AU时调整所述UV池路径长度和/或UV波长直到获得线性信号。 37.如权利要求36所述的方法，其中执行调整UV池路径长度和/或UV波长直到所述UV信号低于2.5AU。 38.如权利要求34-37中任一项所述的方法，其中所述连续色谱系统选自下述组：周期逆流色谱、模拟移动床色谱、连续逆流切向色谱和顺序多柱连续色谱。 39.如权利要求34-38中任一项所述的方法，其中背景吸收度小于2.0Au并且所述HCCF中所述蛋白质的所述浓度多达31g/L，所述方法包括将所述路径长度选为≤ 2.0mm，并且所述波长选为280nm。 40.如权利要求39所述的方法，其中所述路径长度选为在0.05-0.35mm之间。 41.如权利要求34-38中任一项所述的方法，其中背景吸收度小于2.1Au并且所述HCCF中所述蛋白质的所述浓度多达41g/L，所述方法包括将所述路径长度选为≤1.0mm，并且所述波长选为280nm。 42.如权利要求41所述的方法，其中所述路径长度选为在0.05-0.20mm之间。 43.如权利要求34-38中的任一项所述的方法，其中背景吸收度小于2.0Au并且所述HCCF中所述蛋白质的所述浓度多达26g/L，所述方法包括将所述路径长度选为≤0.5mm，并且所述波长选为280nm。 44.如权利要求34-38中的任一项所述的方法，其中背景吸收度小于1.2Au并且所述HCCF中所述蛋白质的所述浓度多达41g/L，所述方法包括将所述路径长度选为≤2mm，并且所述波长选为300nm。 45.一种色谱系统，包括至少一个色谱柱（1；39、47、59；107、109、111、113），所述色谱系统配置成： -根据权利要求1-27中的任一项确定所述至少一个色谱柱的操作状态；以及 -根据所确定的操作状态控制不同的色谱工艺步骤的开始和停止。 46.如权利要求45所述的色谱系统，进一步配置成： -在所述色谱工艺期间连续确定所述操作状态，并且 -根据所确定的操作状态实时控制所述不同的色谱工艺步骤的所述开始和停止。 47.一种包括至少两个柱（39、47、59；107、109、111、113）的周期逆流色谱系统，所述周期流色谱系统配置成： -检测进料信号（201），所述进料信号（201）表示向所述柱的入口提供的进料材料的成分； -检测流出物信号（203、205、207、209），所述流出物信号（203、205、207、209）表示来自所述系统中的每个柱的所述流出物的成分； -根据权利要求1-27中的任一项确定每个色谱柱的所述操作状态；以及 -取决于所确定的操作状态，控制到所述柱以及所述柱之间的所述进料。 48.如权利要求47所述的周期逆流色谱系统，进一步配置成： -在所述色谱工艺期间连续确定所述操作状态；以及 -取决于所确定的操作状态，实时控制到所述柱以及所述柱之间的进料。 49.如权利要求47或48所述的周期逆流色谱系统，进一步配置成：取决于所确定的操作状态，控制对于所述进料和缓冲泵（31、37；101、103、105）的流率。 50.如权利要求47-49中的任一项所述的周期逆流色谱系统，进一步配置成：通过根据所确定的操作状态调整不同的柱应该在加载区中多久以及在哪个位置来补偿不同的柱性质和/或流率中的任何差异。
所属类别：	发明专利