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原文传递口蹄疫病毒定量检测试纸卡及其制备方法

专利名称：	口蹄疫病毒定量检测试纸卡及其制备方法
摘要：	本发明涉及口蹄疫病毒定量检测试纸卡及其制备方法，属于口蹄疫病毒快速检测技术领域。本发明所述试纸卡包括卡壳、PVC衬板、吸收垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫，所述金标垫上标有兔抗O型、A型或亚洲I型口蹄疫病毒抗体；所述硝酸纤维素膜上包被标有羊抗兔IgG抗体的质控带和标有兔抗O型、A型或亚洲I型口蹄疫病毒抗体的检测带。本发明所述试纸卡能够确定口蹄疫O型、A型或亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒及其含量，并且操作简单快速，适合于疫苗质量的检测与评价。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	甘肃;62
申请人：	中国农业科学院兰州兽医研究所
发明人：	蒋韬;林密;李昕;孙燕燕;李峰松;包艳芳;陈夏辉;杨光
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201910646237.X
公开号：	CN110297088A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	瞿晓晶
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	730046 甘肃省兰州市城关区盐场路徐家坪1号
主权项：	1.口蹄疫病毒定量检测试纸卡，所述试纸卡包括卡壳(1)、PVC衬板(2)、吸收垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、金标垫(5)和样品垫(6)，其特征在于，所述金标垫上标有兔抗O型、A型或亚洲I型口蹄疫病毒抗体；所述硝酸纤维素膜上包被标有羊抗兔IgG抗体的质控带(7)和标有兔抗O型、A型或亚洲I型口蹄疫病毒抗体的检测带(8)。 2.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征在于，所述试纸卡检测的样品包括口蹄疫疫苗半成品、口蹄疫疫苗成品、含口蹄疫病毒的组织或含口蹄疫病毒的液体样品。 3.根据权利要求2所述的试纸卡，其特征在于，所述口蹄疫疫苗成品在检测前进行破乳处理；所述含口蹄疫病毒的组织在检测前进行分散处理；所述含口蹄疫病毒的液体样品在检测前进行离心，取上清。 4.根据权利要求3所述的试纸卡，其特征在于，所述破乳处理为：将口蹄疫疫苗成品与破乳剂按照质量比为(4～5):1混合，振荡后3000～5000rpm离心10～15min，取下层液体；所述破乳剂为正丁醇、正戊醇或三氯乙烯。 5.根据权利要求3所述的试纸卡，其特征在于，所述分散处理为：将含口蹄疫病毒的组织进行研磨，然后与分散剂按照质量比为1:5混合，4℃浸毒过夜，次日以3000～5000rpm离心5～10min，取上清；所述分散剂为0.11mol/L磷酸盐缓冲液或DMEM培养液。 6.权利要求1～5任一项所述口蹄疫病毒定量检测试纸卡的制备方法，包括以下步骤： 1)调节胶体金溶液的pH至8.0～8.5，加终浓度为2～15μg/ml O型、A型或亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒抗体，搅拌30～40min，加入终浓度为0.5～1％的酪蛋白，搅拌30～40min，8000～10000rpm离心30～60min，弃去上清，所得沉淀复溶于胶体金溶液体积1/10～1/20的胶体金缓冲液中，得到免疫胶体金溶液，将所述免疫胶体金溶液进行喷涂，得到标有兔抗O型、A型或亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒抗体的金标垫； 2)使用磷酸盐缓冲液，分别将羊抗兔IgG抗体作为质控带抗体稀释至0.2～1mg/mL，将标有兔抗O型、A型或亚洲I型口蹄疫病毒抗体作为检测带抗体稀释至0.2～1mg/mL，分别按1～2μL/cm的喷量分别将质控带抗体和检测带抗体喷于硝酸纤维素膜上，形成质控带与检测带，37℃干燥后，置于封闭液中浸泡3～5min，取出后37℃干燥； 3)将试纸卡进行组装；所述步骤1)和步骤2)没有时间先后顺序的限定。 7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述胶体金缓冲液为含质量百分含量为5～15％的海藻糖、质量百分含量为1％的酪蛋白和质量百分含量为0.5～1‰的NP-40的pH值为7.4、摩尔浓度为0.11mol/L的磷酸盐缓冲液。 8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述封闭液为含质量百分含量为2.5～5％的牛血清白蛋白和质量百分含量为0.5～1‰NP-40的pH值为7.4，摩尔浓度为0.11mol/L的磷酸盐缓冲液。
所属类别：	发明专利