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原文传递含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP中的应用

专利名称：	含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP中的应用
摘要：	本发明属于特异性分子识别材料领域，公开了一种含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c‑di‑GMP含量中的应用。本发明在苯并噻唑的3位N位置引入甲基使其离子化，使结构中的给电子基团和吸电子基团形成了推‑拉电子作用的共轭结构，并通过碳碳双键增加跃迁的共轭体系，使其产生的荧光向近红外区移动，增强荧光化合物的荧光量子产率。该化合物可诱导c‑di‑GMP形成G‑四链体复合物，导致化合物的荧光增强，以此可实现对细菌信号分子c‑di‑GMP的荧光检测，且所检测的数值与传统方法HPLC测定的数值非常接近，同时化合物A18是目前报道的诱导c‑di‑GMP能力最强的化合物，可实现纳摩尔级别的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	暨南大学
发明人：	林静;陈卫民;宣腾飞;汪自强
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910598487.0
公开号：	CN110308124A
代理机构：	广州市华学知识产权代理有限公司
代理人：	桂婷
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	510632 广东省广州市天河区黄埔大道西601号
主权项：	1.一种含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于所述的苯并噻唑类化合物结构通式如式I所示：其中，Ar为取代苯环或者芳香杂环；当Ar为取代苯环时，R为-H、-F、-Br、-NO2、-NH2、-N(CH3)2、4-甲基哌嗪-1-基、4-吗啉基、-OH或-OCH3，且不限定R在苯环上的取代的个数，当R在苯环上取代的个数超过一个时，取代基R可以相同也可以不同；当Ar为芳香杂环时，其中的芳香杂环可以为五元含氮杂环、六元含氮杂环、吲哚基或取代吲哚基团。 2.根据权利要求1所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于所述的苯并噻唑类化合物具有如下所示结构： 3.根据权利要求1所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于所述的苯并噻唑类化合物具有如下所示结构： 4.根据权利要求1～3任一项所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针为含有苯并噻唑类化合物、苯并噻唑类化合物的盐形式、苯并噻唑类化合物的溶剂化物中的至少一种的荧光探针。 5.根据权利要求1～3任一项所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：所述的荧光探针还包括一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。 6.根据权利要求1～3任一项所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：所述的苯并噻唑类化合物由以下方法制备得到：2-甲基苯并噻唑与碘甲烷发生甲基化反应得到化合物2，然后将化合物2与Ar-CHO发生亲核反应得到苯并噻唑类荧光化合物，合成路线如下式所示： 7.根据权利要求6所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：所述的苯并噻唑类化合物具体由以下方法制备得到： (1)将2-甲基苯并噻唑溶于溶剂中，加入碘甲烷，然后在氮气气氛下加热回流反应18h～24h，反应结束后即得到化合物2； (2)将化合物2和Ar-CHO溶于溶剂中，加入吡啶作催化剂，然后加热回流反应8h～16h，反应结束后即得到目标产物苯并噻唑类化合物；步骤(1)中所述的2-甲基苯并噻唑和碘甲烷的摩尔比为1：2～3；步骤(1)中所述的溶剂为乙腈、乙醇、DMF、甲苯中的至少一种；步骤(2)中所述的溶剂为甲醇、乙醇中的至少一种；步骤(2)中所述的化合物2、吡啶和Ar-CHO的摩尔比为1：0.2～0.5：1～1.5。 8.根据权利要求1～3任一项所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：所述的利用含有苯并噻唑类化合物的荧光探针检测细菌信使分子c-di-GMP的含量的方法，包括以下步骤： (1)将c-di-GMP标准品的水溶液先加热至95℃并在95℃保持5min，然后自然冷却至室温并在室温下保持10min后，加入苯并噻唑类化合物的DMSO溶液，形成混合溶液1，将混合溶液1在-20℃冰箱中孵育4-12h，然后进行荧光测试，用546nm处的荧光值对样品浓度绘制标准曲线； (2)将待测样品先于100℃加热10分钟，然后13000g离心10分钟除去沉淀的蛋白后后，取上清液加入苯并噻唑类化合物的DMSO溶液，形成混合溶液2，将混合溶液2在-20℃冰箱中孵育4-12h，然后进行荧光测试，根据546nm处的荧光值对照标准曲线得出待测样品中c-di-GMP的浓度。 9.根据权利要求8所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：步骤(1)中所述的混合溶液1中c-di-GMP标准品的浓度为0～10μM；所述的混合溶液1中苯并噻唑类化合物的浓度为2.5～10μM；步骤(2)中所述的混合溶液2中苯并噻唑类化合物的浓度为2.5～10μM；步骤(1)和步骤(2)中所述的荧光检测的条件均为：Ex.485nm,Em.500-700nm。 10.根据权利要求8所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：通过检测细菌信使分子c-di-GMP的增加量或减少量，含有苯并噻唑类荧光化合物的荧光探针能进一步应用于c-di-GMP合成酶或c-di-GMP降解酶活力的检测。
所属类别：	发明专利