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原文传递肝癌肿瘤标志物AFP、甲胎蛋白异质体、GP73抗原同步免疫检测试剂盒、方法及应用

专利名称：	肝癌肿瘤标志物AFP、甲胎蛋白异质体、GP73抗原同步免疫检测试剂盒、方法及应用
摘要：	本发明涉及涉及肝癌肿瘤标志物AFP、甲胎蛋白异质体、GP73抗原同步免疫检测试剂盒、方法及应用，属于免疫检测技术领域。所述试剂盒包括分别被AFP、LCA‑BSA、GP73标记的磁微粒、AFP、GP73抗体偶联混合的吖啶酯、GP73、AFP校准品、第一激发液、第二激发液、洗液和各种稀释液。采用所述试剂盒和检测方法，灵敏度高、特异性强、准确性高，检测时间短，有助于良性肝病和恶性肝病的鉴别和肝癌的早期诊断。对于提高肝癌患者早期诊断率和延长生存率方面有重要的作用，具有广泛的临床应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	万东山
发明人：	万东山
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201910703230.7
公开号：	CN110320370A
代理机构：	洛阳公信知识产权事务所(普通合伙)
代理人：	时亚娟
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	300000 天津市和平区气象台路22号
主权项：	1.肝癌肿瘤标志物AFP、甲胎蛋白异质体、GP73抗原同步免疫检测试剂盒，其特征在于：包括：微孔板；第一容器，其中容纳GP73抗体标记的磁微粒；第二容器，其中容纳AFP抗体标记的磁微粒；第三容器，其中容纳LCA-BSA标记的磁微粒；第四容器，其中容纳AFP、GP73抗体偶联混合的吖啶酯；分别容纳不同浓度GP73抗原校准品的若干容器；分别容纳不同浓度AFP抗原校准品的若干容器；分别容纳有校准品稀释液、洗液、第一激发液、第二激发液、磁微粒稀释液和/或吖啶酯偶联物稀释液的容器；所述洗液为磷酸盐缓冲液，内含吐温20；所述第一激发液为内含H2O2的硝酸溶液；所述第二激发液为NaOH溶液；所述磁微粒稀释液和吖啶酯偶联物稀释液均为内含牛血清白蛋白和吐温20的磷酸缓冲液；其中，所述GP73抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO：1；所述AFP抗原的氨基酸序列如SEQID NO：2。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述AFP、GP73抗体偶联混合的吖啶酯是将GP73多克隆抗体标记吖啶酯和AFP单克隆抗体标记吖啶脂等比例混合后获得。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其与特征在于：所述LCA-BSA是由牛血清蛋白第五片段标记的LCA。 4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒是粒径2.8μm的含有甲苯璜酰基团的磁微粒。 5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述吖啶酯为吖啶琥珀酰亚胺酯。 6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述校准品稀释液的配方为：磷酸氢二钠2.96g/L、磷酸二氢钠0.29g/L、氯化钠9.0g/L、吐温20 1.0mL/L、ProcoLin 300 1.0mL/L和300ml/L小牛血清；所述洗液的配方为：0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液、体积分数为0.05%的吐温20；所述第一激发液的配方为：0.05M硝酸溶液、体积分数为0.15%的H2O2；所述第二激发液的配方为：0.2M NaOH溶液；所述磁微粒稀释液的配方为：0.01M pH7.4磷酸缓冲液、质量体积百分数为0.5%的牛血清白蛋白和体积分数为0.1%的吐温20；所述吖啶酯偶联物稀释液的配方为：0.02M pH7.4磷酸缓冲液、质量体积百分数为1%的牛血清白蛋白和体积分数为0.1%的吐温20。 7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述分别容纳不同浓度GP73抗原校准品的若干容器，包括：（1）第5.1容器，其中容纳浓度为50 ng/ml GP73抗原校准品S1；（2）第5.2容器，其中容纳浓度为100 ng/ml GP73抗原校准品S2；（3）第5.3容器，其中容纳浓度为250 ng/ml GP73抗原校准品S3；（4）第5.4容器，其中容纳浓度为500 ng/ml GP73抗原校准品S4；（5）第5.5容器，其中容纳浓度为1000 ng/ml GP73抗原校准品S5。 8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述分别容纳不同浓度AFP抗原校准品的若干容器，包括：（1）第6.1容器，其中容纳浓度为5 ng/ml AFP抗原校准品S1；（2）第6.2容器，其中容纳浓度为25 ng/ml AFP抗原校准品S2；（3）第6.3容器，其中容纳浓度为100 ng/ml AFP抗原校准品S3；（4）第6.4容器，其中容纳浓度为300 ng/ml AFP抗原校准品S4；（5）第6.5容器，其中容纳浓度为600 ng/ml AFP抗原校准品S5。 9.根据权利要求1-8任意一种所述的试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）将样品加入到微孔板的微孔中，将不同浓度的GP73抗原校准品、AFP抗原校准品分别加入到微孔中，加样量分别为50μL；（2）将GP73抗体标记的磁微粒、AFP抗体标记的磁微粒和LCA-BSA标记的磁微粒分别加入到加有样品的不同微孔中，加入量均为15μg；（3）将微孔板置37℃温育30分钟；（4）微孔板施加磁力以吸住磁微粒，弃去微孔中液体并洗涤；（5）将浓度为0.3μM的AFP、GP73抗体偶联混合的吖啶酯分别加入各孔中，加样量为100μL，37℃温育30分钟；（6）微孔板施加磁力以吸住磁微粒，弃去孔中液体并洗涤；（7）向各微孔中同时滴加第一激发液和第二激发液各50μL，同时用闪光发光仪检测各微孔的相对发光单位；（8）根据AFP、GP73校准品的剂量和发光值，采用双对数拟合曲线，分别计算AFP、AFP-L3、GP73样品的浓度。 10.根据权利要求1-8任意一种所述的试剂盒在良性和恶性肝病的鉴别以及肝癌的早期诊断中的应用。
所属类别：	发明专利