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原文传递一种运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法

专利名称：	一种运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法
摘要：	本发明公开了一种运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，该方法基于表面增强拉曼散射原理，运用核壳结构纳米星作为基底检测肝癌肿瘤标志物甲胎蛋白。先运用种子生长法合成金纳米星，为了增强纳米星的SERS活性，在金纳米星的表面包裹银层形成金银双金属纳米颗粒。通过在其表面包裹硅层提高纳米颗粒的稳定性，然后在硅层表面修饰抗体形成免疫探针。将免疫探针与硝酸纤维素膜上的不同浓度的抗原通过特异性结合，形成三明治结构，从而进行拉曼光谱的检测，实现甲胎蛋白的高灵敏度特异性检测。该检测方法简单，检测的灵敏度较高、检测范围宽，具有较好的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	陕西;61
申请人：	西安交通大学
发明人：	赵婧;吴晨;李剑君;翁国军;朱键;赵军武
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910181945.0
公开号：	CN109900911A
代理机构：	西安通大专利代理有限责任公司
代理人：	徐文权
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	710049 陕西省西安市咸宁西路28号
主权项：	1.一种运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)在TX100溶液中加入氯金酸以及硼氢化钠溶液，然后静置制得种子溶液；在TX100溶液中加入硝酸银以及氯金酸，混合均匀制备生长液；然后向生长液中加入抗坏血酸以及种子溶液，制备得到金纳米星溶液； 2)在金纳米星溶液中加入不同浓度的硝酸银和抗坏血酸溶液，然后加入氨水，混合均匀直至颜色不再变化，使得金纳米星表面包裹银层，最终合成金银双金属纳米星溶液； 3)在金银双金属纳米星溶液中加入mPEG-SH，然后离心重悬在乙醇与水的混合液中；再向溶液中加入TEOS以及氨水，搅拌后进行离心清洗，最后重悬在水中，制备得到金银硅核壳结构纳米星； 4)对合成的金银硅核壳结构纳米星表面进行氨基化，然后向溶液中加入甲胎蛋白抗体，完成免疫探针的制备； 5)运用硝酸纤维素膜作为基底，根据抗原与抗体的特异性结合，通过拉曼光谱的测量，实现甲胎蛋白的检测。 2.根据权利要求1所述的运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，步骤1)中，氯金酸以及硼氢化钠的摩尔比为(20:6)～(25:6)；硝酸银与氯金酸的摩尔比为(5:20)～(5:26)；抗坏血酸与种子溶液的加入体积比为(16:1)～(28:1)。 3.根据权利要求1所述的运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，步骤2)之前还包括表面活性剂的替换步骤：取已制备好的金纳米星溶液，室温下离心，然后去上清，加入CTAB进行清洗。 4.根据权利要求1所述的运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，步骤2)中，硝酸银和抗坏血酸的摩尔比为1:1。 5.根据权利要求1所述的运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，步骤3)之前还包括银层外面修饰步骤：在金银双金属纳米星溶液中加入4-MBA溶液，进行离心，再用水清洗，完成银层外面修饰。 6.根据权利要求1所述的运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，步骤3)中，mPEG-SH加入后在金银双金属纳米星溶液中的浓度为0.05mg/mL。 7.根据权利要求1所述的运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，步骤3)中，TEOS与氨水体积比为(3:10)～(7:10)。 8.根据权利要求1所述的运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，步骤3)中，乙醇与水的体积比为9:2。 9.根据权利要求1所述的运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，步骤4)中，氨基化的具体步骤为：在金银硅核壳结构纳米星溶液中加入APTES搅拌后进行离心，离心后去上清液，用水重悬，然后再加入EDC和NHS，搅拌均匀。 10.根据权利要求1所述的运用核壳结构纳米星检测肝癌肿瘤标志物AFP的方法，其特征在于，步骤5)中，甲胎蛋白的检测范围为0.3μg/mL-3pg/mL，其检测限为0.7pg/mL。
所属类别：	发明专利