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原文传递黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法

专利名称：	黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法
摘要：	本发明属于生物医药技术领域，提供了一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，建立黄芪不同极性部位的UPLC指纹图谱，标定特征峰，利用谱效数学模型分析并辨识黄芪中化学成分的利水消肿活性部位。本发明较全面的反映了黄芪谱效之间的相关性，为其药效物质基础研究及质量控制提供科学有效的方法，可以快速、准确地评价黄芪中具有利水消肿作用的化学成分及活性成分筛选，为黄芪的药效物质基础研究及质量控制提供科学有效的方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山西;14
申请人：	山西大学
发明人：	李爱平;张王宁;秦雪梅
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910595199.X
公开号：	CN110346495A
代理机构：	太原晋科知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	翟冲燕
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	030006 山西省太原市坞城路92号
主权项：	1.一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：建立黄芪不同极性部位的UPLC指纹图谱，标定特征峰，利用谱效数学模型分析并辨识黄芪中化学成分的利水消肿活性部位。 2.根据权利要求1所述的一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：所述利水消肿活性部位为：紫檀烷、Calycosin-7-O-glc-6"-O-acetate、黄芪皂苷 I、紫檀苷、Formononetin-7-O-glc-6"-O-acetate、红车轴草素-7-O-葡萄糖、异黄烷、异黄烷苷、黄芪皂苷 II、异黄芪皂苷 I、黄芪皂苷 III、黄芪甲苷、Kumatakenin、Dihydroxy-dimethoxy isoflavone、Dihydroxy-trimethoxy DHIF。 3.根据权利要求1所述的一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）采用系统溶剂萃取法制备黄芪的不同极性组分；（2）采用UPLC-Q-Exactive技术建立黄芪不同极性部位的指纹图谱；（3）标定特征峰，提取特征峰数据；（4）对不同极性部位进行24 h尿蛋白定量与生化指标的体内药效测定；（5）将指纹图谱特征峰数据和药效活性数据经灰色关联度分析辨识黄芪中化学成分的药效活性成分。 4.根据权利要求2所述的一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：黄芪系统萃取前进行预处理：黄芪粉碎，精密称取4份粗粉，每份200g，分别依次加入10倍和8倍量的蒸馏水回流提取，合并2次水煎液真空浓缩至1 mg/mL即可。 5.根据权利要求2所述的一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：系统溶剂萃取法制备黄芪的不同极性组分的方法具体为：依次使用3倍量有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对黄芪浓缩液进行萃取，分别得到黄芪石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、剩余水四个不同极性部位；回收溶剂、真空干燥，即得不同极性组分的干燥部位。 6.根据权利要求2所述的一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：建立黄芪不同极性部位的指纹图谱的色谱条件为：Waters ACQUITY UPLCHSS T3 色谱柱，流动相A为含0.1%甲酸的水，B为乙腈，体积流量0.3 μL/min；UV检测波长254 nm；柱温30℃；进样量3 μL；洗脱梯度为：0-10 min 99-92% B, 10-15 min, 92-80% B,15-21 min, 80-75% B, 21-24 min, 75-70% B, 24-27 min, 70-65% B, 27-30 min, 35-40% B, 30-33 min, 60-30% B, 33-36 min, 70-99% B, 36-38 min, 99% B, 38-40 min,99-1% B；质谱条件：采用HESI离子化方式，喷雾电压正极3.5 kV，负极2.5 kV，碰撞能量为12.5、25、37.5 eV；加热器温度 300℃，毛细管温度320℃，辅助气体积流量10 arb，鞘气体积流量35 arb；采集模式为正负离子切换，扫描模式采用Full Scan/dd-MS2，采集范围为m/z 100～1500；分辨率采用 MS Full Scan 35000 FWHM，MS/MS 17500 FWHM。 7.根据权利要求2所述的一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：标定特征峰，提取特征峰数据的具体方法为：共有特征峰的保留时间tR 分别为：1.02 min, 17.23 min, 19.32 min, 21.37 min, 21.65 min, 23.33 min, 24.10min, 24.02 min, 24.99 min, 27.11 min, 27.08 min, 29.16 min, 29.84 min, 31.42min, 27.22 min, 30.52 min, 31.28 min, 32.75 min, 34.37 min, 25.18 min, 34.87min。 8.根据权利要求2所述的一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：步骤（4）中实验所用动物为SD大鼠，药效学评价指标为24 h尿蛋白定量与生化指标ALB、BUN、SCr、TG、TCHO和TP。 9.根据权利要求2所述的一种黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法，其特征在于：将步骤三所得特征峰数据和步骤四所得的药效学数据代入谱效数学模型进行分析，采用灰色关联度分析方法，评价各特征峰所代表的的化学成分对药效活性的贡献大小；其中：所述灰色关联度分析方法包括如下步骤：（1）参考序列与比较序列的选择：以黄芪不同极性部位4个药物的28个特征峰作为比较数列即子序列，构成28个子序列记为 [Xi(k)]，以阿霉素肾病大鼠药效学指标24 h尿蛋白含量、ALB、BUN、CK、SCr、TCHO、TG、TP作为母序列记为 [X0(k)]，根据母序列与子序列关联度的大小，来确定各成分含量对药效贡献的大小；（2）关联系数计算：[Xi(k)]与[X0(k)]的关联系数εi(k)由下列公式计算：；k 为不同极性部位黄芪；Xi 为不同极性黄芪的特征峰；εi(k)为第k个不同极性部位黄芪的子序列Xi与母序列X0的关联系数；分别为母序列与子序列绝对差最大、最小值，记为△max、△min；为母序列与子序列的绝对差值，记为△i(k)；ρ 为分辨系数，ρ 取值区间为(0,1)，取 ρ = 0.5。
所属类别：	发明专利