详情

原文传递当归质量的检测方法

专利名称：	当归质量的检测方法
摘要：	本发明公开了一种当归质量的检测方法，参考各匹配化合物脂水分配系数、口服生物利用度、成药性等药代动力学参数筛选标准，二次筛选具有优良药代动力学和较高安全性的化合物群，将这些化合物作为与当归功效相关的“药效成分群”。然后根据当归的“物质‑功效”互作关系，将测定的当归体外/体内生物活性作为监测因子Y，将当归“药效成分群”作为观测因子X，建立当归生物活性与“药效成分群”的偏最小二乘回归模型，找到与当归生物活性呈正相关且相关系数较高的成分，将这些成分作为当归质量评价的“质量标志物”。最后以液质联用技术建立当归“质量标志物”含量测定方法，为当归药材或饮片的整体质量溯源、控制提供产业化路径。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	陕西;61
申请人：	陕西中医药大学
发明人：	唐志书;刘妍如;宋忠兴;江大海;李晓红;杨宁娟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910768789.8
公开号：	CN110376310A
代理机构：	西安佩腾特知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	姚敏杰
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	712046 陕西省咸阳市秦都区渭阳中路1号
主权项：	1.一种当归质量的检测方法，其特征在于：所述的当归为：当归药材或当归饮片；所述的检测方法，是通过建立当归生物活性与当归中主要成分的偏最小二乘关联模型而确立。 2.如权利要求1所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法的包括如下步骤： (1)采用液相质谱联用技术建立不同产地当归的指纹图谱，并结合传统中药数据库，筛选当归的药效成分群； (2)将当归体外抗氧化、体内抗血虚功效指标作为当归质量的监测因子Y，将所述步骤(1)中当归药效成分群作为观测因子X，建立当归生物活性与药效成分群的偏最小二乘回归模型，确定当归生物活性呈正相关且相关系数较高的当归质量检测成分，将这些成分定为当归质量标志物； (3)对步骤(2)中所确定的当归质量标志物，建立含量测定方法学并对方法进行验证。 3.如权利要求2所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法步骤(1)中的液相、质谱方法条件如下： A.液相方法条件：采用C18色谱柱；流动相为0.1％甲酸-水溶液与乙腈的体积比；流速为300μL/min，柱温为30℃，进样量为5μL，检测波长323nm，梯度洗脱参数：洗脱时间0-2min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为98％；洗脱时间2-5min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从98％到85％；洗脱时间5-8min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从85％到70％；洗脱时间8-12min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从70％到50％；洗脱时间12-15min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从50％到33％；洗脱时间15-18min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从33％到20％；洗脱时间18-19min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从20％到0％；洗脱时间19-21min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为0％；洗脱时间21-22min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从0％到98％；洗脱时间22-25min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为98％； B.质谱条件：离子源为电喷雾离子源，正负离子模式采集数据，正负离子源喷射电压分别为5500V、-4500V，雾化温度550℃，雾化气和辅助气为氮气，均为50psi，气帘气35psi。母离子扫描范围50～1600m/z，对超过100cps的8个最强峰进行MS2采集数据，子离子扫描范围为50～1500m/z。 4.如权利要求3所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述的检测方法步骤(1)中的方法条件，确定了当归中22个指纹图谱所共有的特征峰，分别是欧当归内酯A、藁本内酯、洋川芎内酯A、5-甲氧基补骨脂素、绿原酸、异茴芹内酯、异虎耳草素、阿魏酸、二氢欧山芹醇当归酸酯、洋川芎内酯Ⅰ、6-羟基-7,8-二甲氧基香豆素、阿魏酸乙酯、东莨菪内酯、8-羟基补骨脂素、补骨脂素、芦丁、欧前胡素、芒柄花素、滨蒿内酯、亚油酸甲酯、二水槲皮素、莪术醇。 5.如权利要求3或4所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述的检测方法步骤(1)中，筛选当归药效成分群的参数指标是脂水分配系数、口服生物利用度和成药性。 6.如权利要求5所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述方法筛选出的当归药效成分群为18个组分，分别是欧当归内酯A、藁本内酯、洋川芎内酯A、5-甲氧基补骨脂素、异茴芹内酯、阿魏酸、二氢欧山芹醇当归酸酯、洋川芎内酯Ⅰ、6-羟基-7,8-二甲氧基香豆素、阿魏酸乙酯、东莨菪内酯、8-羟基补骨脂素、补骨脂素、欧前胡素、芒柄花素、滨蒿内酯、二水槲皮素、莪术醇。 7.如权利要求2或6所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法步骤(2)中，当归体外抗氧化活性的检测方法是ABTS+·自由基清除率％、DPPH·自由基清除率％、羟自由基清除能力；所述的当归体内抗血虚功效的检测指标是谷胱甘肽过氧化物酶活性。 8.如权利要求7所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法步骤(2)中，所述当归质量标志物，其变量投影重要性指标VIP数值大于1。 9.如权利要求8所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述检测方法中，当归质量标志物为欧当归内酯A、藁本内酯和阿魏酸。 10.如权利要求9所述的当归质量的检测方法，其特征在于：所述质量标志物的含量测定方法学建立和验证包含的条件如下：试品溶液的制备方法：称取当归粉末0.2g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入20mL70％甲醇，称定重量，85℃水浴回流30min，静置放冷，称定重量，加入溶剂补足减少的重量，摇晃均匀后静置，取上清液过滤，取续滤液备用；混合对照溶液的制备方法：取阿魏酸、欧当归内酯A和藁本内酯对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成质量浓度分别为0.1、0.2和0.1mg/mL的混合对照溶液，即得；液相条件：采用C18色谱柱；流动相为0.1％甲酸-水溶液与乙腈的体积比；流速为300μL/min，柱温为30℃，进样量为5μL，检测波长323nm，梯度洗脱参数：洗脱时间0-2min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为98％；洗脱时间2-5min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从98％到85％；洗脱时间5-8min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从85％到70％；洗脱时间8-12min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从70％到50％；洗脱时间12-15min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从50％到33％；洗脱时间15-18min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从33％到20％；洗脱时间18-19min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从20％到0％；洗脱时间19-21min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为0％；洗脱时间21-22min,0.1％甲酸-水溶液体积占比从0％到98％；洗脱时间22-25min,0.1％甲酸-水溶液体积占比为98％；质谱条件：定量质谱分析采用ESI正离子模式进行扫描，检测模式为多反应监测，离子化参数为离子喷雾电压，正离子模式+5500v；雾化温度550℃，雾化气和辅助气为氮气，均为50psi，气帘气35psi；所述3种当归质量标志物检测方法的线性范围为：0.38～380.00μg/mL。
所属类别：	发明专利