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原文传递结合测定

专利名称：	结合测定
摘要：	描述了用于测定包含淋巴细胞活化基因‑3(LAG‑3)蛋白或其片段、衍生物或类似物的制剂的MHC II类结合活性的方法。所述方法包括使用生物层干涉术(BLI)测定所述LAG‑3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHC II类分子的结合。所述方法可以用作所述化合物的良好生产规范(GMP)级生产中的质量控制测定。还描述了用于进行所述方法的探针和试剂盒。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	法国;FR
申请人：	伊缪泰普有限公司
发明人：	陈敏;贾晓青
专利状态：	有效
申请日期：	2017-12-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201780086879.8
公开号：	CN110383046A
代理机构：	广州华进联合专利商标代理有限公司
代理人：	刘培培;黄爱娇
分类号：	G01N21/45(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	法国奥赛
主权项：	1.一种用于测定包含淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)蛋白或其片段、衍生物或类似物的制剂的MHC II类结合活性的方法，其中所述方法包括使用生物层干涉术(BLI)测定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHC II类分子的结合。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，实施方法包括测定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHC II类表达细胞上存在的MHC II类分子的结合。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物被固定化到BLI探针的试剂层，并且所述MHC II类表达细胞是在溶液中的。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述MHC II类表达细胞可以至少1E6/mL，优选至少4E6/mL或8E6/mL的密度存在。 5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述试剂层已用封闭试剂预处理以最小化所述MHC II类表达细胞与所述试剂层的非特异性结合。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述封闭试剂包括白蛋白，优选牛血清白蛋白(BSA)。 7.根据权利要求2至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述MHC II类表达细胞是Raji细胞。 8.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述MHC II类表达细胞是从冷冻储备溶液获得的解冻的、即用型细胞。 9.根据前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述方法包括针对多种不同浓度的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物，测定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与所述MHC II类分子的结合速率，以及产生针对所述结合速率的剂量-应答曲线。 10.根据前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在与用于测定所述制剂的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物的结合相同的条件下，通过使用BLI测定参比样品的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物与MHC II类分子的结合来测定LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物的所述参比样品的MHC II类结合活性，并且将针对所述参比样品测定的所述MHC II类结合活性与针对所述制剂测定的所述MHC II类结合活性进行比较。 11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述参比样品的所述MHC II类结合活性被设定为100％。 12.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于，所述参比样品包含LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物，所述LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物已进行处理以降低其MHCII类结合活性。 13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述参比样品的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或类似物已去糖基化、在37℃下储存至少12天、氧化、通过酸或碱处理变性，或暴露于光至少5天。 14.一种用于测定LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物的MHC II类结合活性的BLI探针，所述BLI探针包括试剂层，所述LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物固定化至所述试剂层。 15.根据权利要求14所述的探针，其特征在于，所述试剂层已用封闭试剂预处理以最小化所述MHC II类表达细胞与所述试剂层的非特异性结合。 16.根据权利要求15所述的探针，其特征在于，所述封闭试剂包括白蛋白，优选BSA。 17.一种用于测定LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物的MHC II类结合活性的试剂盒，所述试剂盒包括BLI探针，和MHC II类表达细胞，所述BLI探针具有试剂层，所述LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物固定化到所述试剂层。 18.根据权利要求17所述的试剂盒，其特征在于，所述BLI探针的所述试剂层已用封闭试剂预处理以使所述MHC II类表达细胞与所述试剂层的非特异性结合最小化。 19.根据权利要求18所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭试剂包括白蛋白，优选BSA。 20.根据权利要求17至19中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述MHC II类表达细胞是冷冻细胞。 21.根据权利要求17至20中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞是Raji细胞。 22.根据权利要求17至21中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞以至少1E6/mL，优选至少4E6/mL或8E6/mL的密度存在。 23.根据权利要求17至22中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述方法还包括参比样品，所述参比样品包含LAG-3蛋白或其片段、衍生物或类似物。 24.根据权利要求23所述的试剂盒，其特征在于，所述参比样品的所述MHC II类结合活性是已知的。
所属类别：	发明专利