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原文传递一种利用透射电子显微镜鉴定螺旋藻藻丝沥水性能的方法

专利名称：	一种利用透射电子显微镜鉴定螺旋藻藻丝沥水性能的方法
摘要：	本发明涉及螺旋藻生产技术，旨在提供一种利用透射电子显微镜鉴定螺旋藻藻丝沥水性能的方法。该方法包括：从培植池中取钝顶螺旋藻的藻液，用毛细吸管显微分离法挑取长度≥300μm的藻丝单体，培养成藻丝群体；对所得藻丝群体取样，并利用透射电子显微镜观察；如果藻细胞内多磷酸盐颗粒呈弥散状且最大直径不大于0.2μm，表明被鉴定藻丝具有良好沥水性能；如果藻细胞内多磷酸盐颗粒呈聚集状且最大直径大于0.4μm，则表明被鉴定藻丝沥水性能差。本发明基于透射电子显微镜技术鉴别螺旋藻藻丝沥水性能高低，与传统方法相比，不仅简便、高效，而且成本低，并适合高通量筛检。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江大学
发明人：	汪志平;汪凡越;卢奇奇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910580773.4
公开号：	CN110346387A
代理机构：	杭州中成专利事务所有限公司
代理人：	周世骏
分类号：	G01N23/20(2018.01);G;G01;G01N;G01N23
申请人地址：	310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号
主权项：	1.一种利用透射电子显微镜鉴定螺旋藻藻丝沥水性能的方法，其特征在于，包括： (1)从培植池中取钝顶螺旋藻的藻液，用毛细吸管显微分离法挑取长度≥300μm的藻丝单体，培养成藻丝群体； (2)对步骤(1)中所得藻丝群体取样，并利用透射电子显微镜观察；如果藻细胞内多磷酸盐颗粒呈弥散状且最大直径不大于0.2μm，表明被鉴定藻丝具有良好沥水性能；如果藻细胞内多磷酸盐颗粒呈聚集状且最大直径大于0.4μm，则表明被鉴定藻丝沥水性能差。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的培养条件为：以40W日光灯为光源，培养液面的光照强度为54μmol photons·m-2·d-1；按光照12h和黑暗12h交替的方式控制光照条件，光照时温度28℃、黑暗时温度20℃。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法具体包括： (1.1)从规模化生产的培植池中取5mL螺旋藻藻液，用毛细吸管显微分离法挑取长度≥300μm的藻丝单体5条，分别置于编号且盛有1.0mL Zarrouk培养液的2.0mL Eppendorf管中培养25d，培植成藻丝群体； (1.2)从步骤(1.1)的每只Eppendorf管中各吸取0.1mL藻液，分别转入编号且盛有1.0mL Zarrouk培养液的2.0mL Eppendorf管中继续培养；每只Eppendorf管中剩余0.9mL藻液分别用滤纸过滤收集藻体并编号； (1.3)分别将步骤(1.2)过滤收集到的藻体进行透射电子显微镜的样品制作、观察与分析；若藻细胞内多磷酸盐颗粒呈弥散状且最大直径不大于0.2μm，则为沥水性能好的藻丝；若藻细胞内多磷酸盐颗粒呈聚集状且最大直径大于0.4μm，则为沥水性能差的藻丝； (1.4)根据步骤(1.3)的鉴定结果，从步骤(1.2)继续培养的藻丝中，挑选出沥水性能好的藻丝的Eppendorf管，其中的藻丝的沥水性能即为好的，用于工厂化培植生产。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1.3)中样品制作、观察与分析的过程具体包括：用无菌水清洗藻体3次，2.5％戊二醛固定2h，pH7.2的磷酸缓冲液漂洗3次，用锇酸固定1h；pH7.2的磷酸缓冲液漂洗3次，用50％、70％、80％、90％、95％和100％乙醇逐级脱水；用100％丙酮脱水，依次用1:1的丙酮:渗透液渗透、1:3的丙酮:渗透液渗透、全渗透液渗透过夜；包埋于0.5ml离心管中，切片，醋酸双氧铀和柠檬酸铅双染色，用日本产JEM-1200EX型透射电子显微镜观察并摄影。
所属类别：	发明专利