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原文传递一种唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法以及对该类固醇激素的检测方法

专利名称：	一种唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法以及对该类固醇激素的检测方法
摘要：	本发明公开了一种唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法。该方法包括固相萃取柱活化；样本处理后加入固相萃取柱；对固相萃取柱淋洗、洗脱，收集洗脱液；加入有机溶剂涡旋混匀，室温离心处理后，转移到96孔板中，封膜待测。采用固相萃取不但可以去除杂质干扰，还可以大幅提高检测灵敏度，满足唾液中痕量类固醇激素的检测要求。与其他前处理方法相比，本法操作简单，节省溶剂，对环境影响小；分析时间短，通量高，7min内即可完成检测。本法使用同位素内标法定量类固醇激素，检测误差小，且通过全面的方法学验证，可用于唾液样本中氢化皮质酮，睾甾酮和脱氢异雄酮的检测和相关疾病的筛查。本发明还公开了一种对唾液固相萃取后的多种类固醇激素的检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳健科医学检验实验室
发明人：	田瑶林;张良滔;陈婉婷
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-29T00:00:00+0800
申请号：	CN201910678779.5
公开号：	CN110389185A
代理机构：	深圳市广诺专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	伍华荣
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	518000 广东省深圳市宝安区新安街道兴东社区67区中粮创智厂区7栋负101
主权项：	1.一种唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法，其特征在于，所述方法包括：步骤01、选取至少两个固相萃取柱，对其进行活化处理；步骤02、取唾液样本和类固醇激素混合标曲工作液，分别往唾液样本和类固醇激素混合标曲工作液内加入稀释剂和内标工作液；混匀后分别加入到经步骤01活化后的固相萃取柱中；步骤03、分别往经过步骤02处理后的固相萃取柱内加入淋洗液，使其流干；步骤04、分别往经过步骤03处理后的固相萃取柱内加入洗脱液，并用EP管收集洗脱液，氮气吹干；步骤05、往步骤04收取的装有洗脱液的EP管内加入甲醇溶液，涡旋混匀，室温离心处理后，转移到96孔板中，封膜待测；所述内标工作液为氘代类固醇激素。 2.根据权利要求1所述的唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法，其特征在于，所述固相萃取柱的吸附剂为键合N-乙烯基吡咯烷酮的聚苯乙烯基质。 3.根据权利要求1所述的唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法，其特征在于，所述类固醇激素混合标曲工作液为氢化皮质酮储备液、睾甾酮储备液、脱氢异雄酮储备液和甲醇的混合溶液。 4.根据权利要求1所述的唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法，其特征在于，所述步骤01中依次采用1mL甲醇、1mL超纯水对固相萃取柱进行活化处理。 5.根据权利要求1所述的唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法，其特征在于，所述步骤02中的稀释剂通过在30mL甲醇中加入30mL超纯水和600μL甲酸，涡旋混匀2min制备而成。 6.根据权利要求1所述的唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法，其特征在于，所述步骤03中的淋洗液通过在35mL甲醇中加入65mL超纯水，涡旋混匀2min制备而成。 7.根据权利要求1所述的唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法，其特征在于，所述步骤04中的洗脱液通过在99mL甲醇中加入1mL甲酸，涡旋混匀2min。 8.根据权利要求1所述的唾液中多种类固醇激素的固相萃取方法，其特征在于，所述步骤05中的甲醇溶液浓度为15％；离心处理的条件为15000rpm。 9.一种对唾液固相萃取后的多种类固醇激素的检测方法，其特征在于，所述方法包括：步骤01、将待测唾液样品和混合标曲工作液按照权利要求1-8中任意一项所述的固相萃取方法进行前处理；步骤02、设置前处理后的混合标曲工作液为对照组；步骤03、对前处理后的待测唾液样品和前处理后的混合标曲工作液用液相色谱串联质谱仪进行检测；所述液相色谱串联质谱仪的检测条件包括：色谱柱为C18柱，柱温40℃，进样量40μL，流动相分为流动相A和流动相B，采用多反应监测模式进行检测。 10.根据权利要求9所述的对唾液固相萃取后的多种类固醇激素的检测方法，其特征在于，所述流动相A通过将10mL甲醇、190mL超纯水、30.8mg乙酸铵和200uL乙酸，混匀后超声10min制得；所述流动相B通过将180mL甲醇、20mL超纯水、30.8mg乙酸铵和200uL乙酸，混匀后超声10min制得。
所属类别：	发明专利