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原文传递一种同时检测血液样品中多种类固醇激素的方法及试剂盒

专利名称：	一种同时检测血液样品中多种类固醇激素的方法及试剂盒
摘要：	本发明提供一种同时检测血液样品中多种类固醇激素的方法及试剂盒。本发明通过碳酸氢钠的甲醇去蛋白结合，再加上固相支持萃取方法对生物样本进行前处理，然后进入色谱分离及质谱检测，针对每种激素分别选择一对定性离子和一对定量离子，并以其相对保留时间和定性离子对作为定性依据，以标准品制作标准曲线定量。同时，本方法应用三个水平的质控品考察方法的准确性、有效性，避免检测结果失真。本发明首次实现应用HPLC‑MS/MS技术对一份血清样本中的十八种激素同时检测的目的，减小干扰物影响，该方法操作简便快速，通量高、成本低，有效实时监测人体内类固醇激素水平，对临床疾病诊断提供充分依据，易于临床推广及普及。
专利类型：	发明专利
申请人：	山东英盛生物技术有限公司
发明人：	冯振;景叶松;弭兆元
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T02:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010135468.7
公开号：	CN111175419A
代理机构：	济南圣达知识产权代理有限公司
代理人：	郑平
分类号：	G01N30/06;G01N30/88;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/88
申请人地址：	250101 山东省济南市高新区大正路1777号生物医药园中小企业产业化基地12号楼405厂房
主权项：	1.一种同时检测血液样品中多种类固醇激素的方法，其特征是：对血液样品进行前处理后采用HPLC-MS/MS进行检测；其中，所述前处理过程包括：向血液样品中加入含内标的碳酸氢钠的甲醇溶液，乙酸乙酯或叔丁基甲醚洗脱后正压，得处理液，干燥后将样品复溶于甲醇水溶液中，过滤即得待测样本。 2.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述血液样品是血浆或血清，优选为血清。 3.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述类固醇激素包括11-脱氧皮质酮、11-脱氧皮质醇、17-羟基孕烯醇酮、17α-羟孕酮、21-脱氧皮质醇、醛固酮、雄烯二酮、皮质酮、皮质醇、可的松、脱氢表雄酮、雌酮、雌二醇、雌三醇、孕烯醇酮、孕酮、睾酮和硫酸去氢表雄酮中的任意两种或两种以上。 4.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述的血液样品、含内标的碳酸氢钠的甲醇溶液、乙酸乙酯或叔丁基甲醚体积比为10～20：3～5：60～70，优选为20：5：70；血液样品与甲醇水溶液的体积比为2～4：1；优选为4:1。 5.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述HPLC-MS/MS的条件为：色谱条件：流动相为A：含氟化铵HPLC级水，B：含氟化铵的甲醇；梯度洗脱；质谱条件：正离子/负离子电喷雾离子化的多离子反应监测。 6.如权利要求5所述的方法，其特征是：色谱条件：C18柱，100mm×2.1mm，2.1μm；柱温：40℃；流动相A：含0.2mM氟化铵HPLC级水；流动相B：含0.2mM氟化铵的甲醇，流速0.3mL/min，进样量，15μL；质谱条件：采用电喷雾离子化的多离子反应监测模式，喷雾电压4500V，负离子模式3500V，离子传输管温度325℃，蒸发温度350℃，鞘气35arb，辅气3arb，采用MRM模式采集数据。 7.如权利要求1-5任一所述的方法，其特征是：步骤如下：样品处理：向血清样本中加入含内标的碳酸氢钠的甲醇溶液，涡旋震荡后上样，乙酸乙酯或叔丁基甲醚洗脱后正压，获得处理液，吹干，将样品复溶于40％v/v甲醇水溶液中，过滤后，获得待测样本；所述的血清、含内标的碳酸氢钠的甲醇溶液、乙酸乙酯或叔丁基甲醚体积比为20：5：70，血清与40％甲醇水溶液的体积比为4：1；标准工作液的配制：以甲醇配制各维生素标准品储备液，然后用以经活性炭净化的血清空白样本制备不同梯度的混合标准溶液分装后，-20℃保存备用； HPLC-MS/MS检测：将待测样本通过梯度洗脱模式进入色谱柱分离后，采用电喷雾离子化的多离子反应监测模式，对待测物质进行定性与定量检测；优选的，所述血液样品为血清。 8.一种同时检测血液样品中多种类固醇激素的试剂盒，其特征是：含不同浓度梯度的混合标准溶液，碳酸氢钠的甲醇溶液，乙酸乙酯或叔丁基甲醚，40％甲醇水溶液，体积分数0.2mM的氟化铵的甲醇，体积分数0.2mM的氟化铵水和质控品。 9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征是：所述类固醇激素包括11-脱氧皮质酮、11-脱氧皮质醇、17-羟基孕烯醇酮、17α-羟孕酮、21-脱氧皮质醇、醛固酮、雄烯二酮、皮质酮、皮质醇、可的松、脱氢表雄酮、雌酮、雌二醇、雌三醇、孕烯醇酮、孕酮、睾酮和硫酸去氢表雄酮中的任意两种或两种以上；或，所述质控品含有三个水平的低、中、高浓度质控血清，质控品由活性炭净化的血清空白样本添加混合激素标准物质制得，并通过检测确定靶值。 10.权利要求1-7任一项所述方法和/或权利要求8或9所述试剂盒在多种类固醇激素检测中的应用；优选的，所述类固醇激素包括11-脱氧皮质酮、11-脱氧皮质醇、17-羟基孕烯醇酮、17α-羟孕酮、21-脱氧皮质醇、醛固酮、雄烯二酮、皮质酮、皮质醇、可的松、脱氢表雄酮、雌酮、雌二醇、雌三醇、孕烯醇酮、孕酮、睾酮和硫酸去氢表雄酮中的任意两种或两种以上。
所属类别：	发明专利