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原文传递一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法及其应用

专利名称：	一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法及其应用
摘要：	本发明公开了一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法，先样品前处理，通过萃取对样本中的维生素进行提取，再色谱分离及质谱检测，针对每种维生素分别选择一对定性离子和一对定量离子，以各种维生素的相对保留时间和定性离子对作为定性依据，以标准品制作标准曲线定量。同时，本方法应用三个水平的质控品考察方法的准确性、有效性，避免检测结果失真。本发明首次实现了应用LC‑MS技术对一份血清样本中的六种脂溶性维生素同时检测的目的，减小了干扰物影响，该方法操作简便快速分析时间仅10min，高通量、成本低，有效监测人体内脂溶性维生素水平，对维生素的合理、安全补充具有指导意义，易于临床推广及普及。
专利类型：	发明专利
申请人：	广东南芯医疗科技有限公司
发明人：	张召;刁嘉茵;雷春燕;肖妮;陈涛
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T22:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010074340.4
公开号：	CN111175405A
代理机构：	广州嘉权专利商标事务所有限公司
代理人：	许飞
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/88;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/88
申请人地址：	510000 广东省广州市黄埔区瑞和路83号A栋A501
主权项：	1.一种血液脂溶性维生素的检测方法，其特征在于，采用液质联用方法进行检测，包括以下步骤：一.溶液的制备供试品溶液制备：取样品加入到甲醇中，混匀离心，取上清后用正己烷萃取3～4次，收集上清液，氮气吹干，甲醇复溶得供试品溶液；标准品溶液的制备：将维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2标准品用甲醇溶解配制成标准品母液，将维生素K1用异丙醇溶解为标准品母液，将各标准品母液用甲醇进行稀释至同一容量瓶中，得到系列不同浓度的混合标准品溶液；内标溶液制备：将维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2标准品用甲醇溶解配制成标准品母液，将维生素K1用异丙醇溶解为标准品母液，将各标准品母液用甲醇进行稀释至同一容量瓶中，得到系列不同浓度的混内标溶液；二.测定将上述制备的供试品溶液、标准品和内标溶液进行LC-MS测定。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述血液样品为血浆或血清样品。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中洗脱采用梯度方式洗脱，流动相A为5mM甲酸铵和0.1％甲酸混合的乙腈溶液，流动相B为0.1％甲酸和5mM乙酸铵混合的甲醇溶液。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备的操作为：取样品200～300μL，加入甲醇溶液800～900μL，混匀离心，取上清后用正己烷萃取3～4次，收集上清液，氮气吹干，100～150μL甲醇复溶得供试品溶液。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，标准品溶液制备的操作为：用异丙醇配制维生素K1的标准储备液，用甲醇分别配制维生素A、维生素25(OH)D2、维生素25(OH)D3、维生素E和维生素K2的标准储备液，将各标准储备液用甲醇进行稀释至同一容量瓶中，得到系列不同浓度的标准品溶液。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：梯度洗脱程序为：0-2min 0％B，2-9min 0-100％B，9-12 100％B，12-12.1min 100％-0％B，12.1-15min 0％B。 7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，MS检测的条件为：电喷雾离子源ESI源；采用正离子扫描模式；雾化气流量：3L/min；加热气流量:10L/min；接口温度：300℃；加热块温度：400℃；DL温度：250℃；干燥气流量：10L/min。 8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，MS检测过程中组分测量参数如下所示： 9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：色谱柱为WATERS CORTECS UPLC C18Column色谱柱：2.1mm×100mm，1.6μm；柱温为35～40℃；优选的，柱温为40℃。
所属类别：	发明专利