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原文传递多种脂溶性维生素的含量测定方法

专利名称：	多种脂溶性维生素的含量测定方法
摘要：	本发明公开了多种脂溶性维生素的含量测定方法，通过液相质谱法检测血清样本，带入标准曲线得到血清样本中的多种脂溶性维生素的含量。对比现有检测方法，本发明的方法具有多种物质同时检测、高灵敏度、高选择性、可定性、可定量、步骤简单、适用范围广、快速准确的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东博济医药科技有限公司
发明人：	李鹏战;赵卫芳;王素香;程相标;吴冠勋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910419625.4
公开号：	CN110133135A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	张贵宾
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	274000 山东省菏泽市高新区万福办事处中华西路2059号启迪之星205室
主权项：	1.一种多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）标准溶液的制备：分别精密称量5种脂溶性维生素，用50%甲醇水稀释，得到5种维生素的储备液，浓度均为10μg/mL，然后将储备液逐级稀释得到5种脂溶性维生素的标准工作溶液；用甲醇溶解内标化合物，得到内标维生素A-d8，25-羟基维生素D2-d6，25-羟基维生素D3-d6，维生素E-d6，维生素K1-d7的储备液浓度分别为50μg/mL、20μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、5μg/mL，然后将内标储备液用甲醇稀释得到内标工作溶液；（2）标准曲线的制备取步骤（1）制备的标准工作溶液100μL，加入200μL的内标工作溶液，涡旋混合1min，加入萃取液1000uL，涡旋混合3min，12000rpm离心10min，取上清液800uL置洁净离心管内，室温氮气吹干，再加入100μL 50%乙腈水溶液复溶，得到脂溶性维生素的校正标样；将校正标样进行液相质谱分析，以待测物/内标峰面积比对待测物浓度进行线性回归，得到标准曲线；（3）待测血清样本的制备：精密吸取血清样品100μL置于洁净的离心管中，加入200μL内标工作溶液，涡旋混合1min，加入萃取液1000uL，涡旋混合3min，12000rpm离心10min，取上清液800uL置洁净离心管内，室温氮气吹干，加入100μL 50%乙腈水溶液复溶，得到待测血清样本；（4）待测血清样本检测：将步骤（3）制备的待测血清样本进行液相质谱检测，检测结果代入步骤（2）所得标准曲线，可以回算出血清样本中脂溶性维生素的浓度。 2.根据权利要求1所述的多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：所述5种脂溶性维生素分别为维生素A、25羟基维生素D2、25羟基维生素D3、维生素E和维生素K1。 3.根据权利要求1所述的多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：所述步骤（1）中5种脂溶性维生素工作液的浓度范围分别为维生素A：20-1000ng/mL；25羟基维生素D2：2-100ng/mL；25羟基维生素D3：2-100ng/mL；维生素E:200-10000ng/mL；维生素K1:0.2-10ng/mL。 4.根据权利要求1所述的多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：所述脂溶性维生素萃取液为乙酸乙酯、正己烷或叔丁基甲基醚，优选为正己烷。 5.根据权利要求1所述的多种脂溶性维生素的含量测定方法，其特征在于：所述色谱检测条件为：色谱柱：Waters C18（2.1*100mm，2.5μm）色谱柱，流动相A相为0.1%甲酸水溶液，B相为2mmol/L甲酸铵的水溶液，流速为0.2-0.4mL/min，柱温40℃-50℃，进样体积10uL。
所属类别：	发明专利