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原文传递一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法

专利名称：	一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法
摘要：	本发明公开了一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，属于维生素检测技术领域。本发明包括采用简单的液液萃取的方法对血液样本进行前处理；利用色谱分离和质谱检测的方法，以五种脂溶性维生素的相对保留时间和检测的定量离子对信息作为定性依据，采用内标标准曲线法进行定量分析。本发明方法的回收率、检测限和精密度等各项技术指标均符合要求，且操作简单、误差小、分析时间短、重现性好，满足临床样本检测的要求，易于推广及普及。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	杭州佰辰医学检验所有限公司
发明人：	彭军;陈从艳;吴超超;高强;袁芳;易婉婉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910799963.5
公开号：	CN110487943A
代理机构：	无锡市汇诚永信专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	张欢勇
分类号：	G01N30/14(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	310030 浙江省杭州市西湖区三墩镇石祥西路859号紫金启真大厦4号楼101-1室、201室
主权项：	1.一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于：包括血液样品前处理：人血液样品中加入至少一种脂溶性维生素内标物，并进行蛋白沉淀，混合均匀后添加正己烷萃取，离心取上清液并进行干燥，加入复溶剂，均匀混合离心得到待测样品；其中，人血液样品、内标物溶液、正己烷萃取液体积比为1:3:6；所取上清液与对应原血液样品溶液的体积比为3:1；复溶液与人血液样品的溶液体积比为3:2；配置标准溶液：通过甲醇配置维生素标准溶液，混合标准溶液装于1.5mLEP管中，-20℃保存备用，并用甲醇配制维生素内标储备液；超高效液相色谱质谱联用检测待测人血液样品：包括设定色谱条件和质谱条件：其中色谱条件为色谱柱柱温50℃，流动相A：体积分数0.1％甲酸的水；流动相B：0.1％甲酸的甲醇溶液；梯度洗脱条件：0～1min，75～86％B，1～1.4min，86～98％B，1.4～2.6min，98～100％B，2.6～3.2min，100～75％B，流速：0.4mL/min，进样量：7μL。 2.根据权利要求1所述的一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述脂溶性维生素内标物包括VA-d8、25(OH)D2-d3、25(OH)D3-d6、VE-d6、VK1-d7中的至少一种。 3.根据权利要求1所述的一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述脂溶性维生素内标物溶液为采用甲醇配制。 4.根据权利要求1所述的一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述复溶剂为70％甲醇水溶液。 5.根据权利要求1所述的一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述质谱条件包括使用正电离子模式，多反应监测离子扫描MRM进行扫描。 6.根据权利要求5所述的一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于，选择正电离子模式中正离子电喷雾离子化的多离子反应检测模式，毛细管电压：3.5kV；锥孔电压：25V；脱溶剂温度：500℃；脱溶剂气：800L/Hr，锥孔气：50L/hr。 7.根据权利要求1所述的一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述人血液样品为血浆或血清。 8.根据权利要求1所述的一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述样品前处理时，进行蛋白沉淀后，涡旋震荡3min，正己烷萃取时，旋涡震荡5min，添加复溶剂后后旋涡震荡2min。 9.根据权利要求1或8所述的一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述行蛋白沉淀涡旋震荡后离心，离心条件：4℃、11000rpm离心15分钟。 10.根据权利要求1或8所述的一种检测血液样品中脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述添加复溶剂后后旋涡震荡后进行离心，离心条件：4℃条件下11000rpm离心3分钟。
所属类别：	发明专利