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原文传递一种检测血液中水溶性维生素的方法

专利名称：	一种检测血液中水溶性维生素的方法
摘要：	本发明提供了一种检测血液中水溶性维生素的方法，包括：利用液相色谱‑质谱联用仪检测检测至少三种浓度的混合标准溶液，得第一检测结果，其中，混合标准溶液包括内标物和水溶性维生素，水溶性维生素包括维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5‑甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C；基于第一检测结果和水溶性维生素的浓度拟合水溶性维生素分别对应的标准曲线方程；将加有沉淀蛋白试剂和一定量内标物的待测血液样本离心，取上清液，并利用液相色谱‑质谱联用仪进行检测，得第二检测结果；基于标准曲线方程和第二检测结果，得到待测血液样本中水溶性维生素的浓度。本方案能够提高血液样本的检测效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京和合医学诊断技术股份有限公司
发明人：	赵金宝;解娜;贾永娟;倪君君
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910837920.1
公开号：	CN110412175A
代理机构：	济南信达专利事务所有限公司
代理人：	程佩玉
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	101111 北京市北京经济技术开发区经海六路5号院14号楼1层、2层、3层、5层、6层、7层
主权项：	1.一种检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，包括：制备至少三种浓度的混合标准溶液，其中，所述混合标准溶液为具有内标物、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C的溶液，且所述至少三种浓度的混合标准溶液中内标物的浓度相同；利用液相色谱-质谱联用仪在预设的检测条件下，分别检测每一种所述混合标准液，获得所述至少三种浓度分别对应的第一检测结果；根据各个所述第一检测结果、所述混合标准溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12、维生素C和内标物的浓度，分别拟合维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C分别对应的标准曲线方程；向待测血液样本中加入沉淀蛋白试剂和与所述混合标准溶液中相同量的内标物，并进行高速离心处理，取离心处理后的上清液；利用利用液相色谱-质谱联用仪在所述检测条件下检测所述上清液，获得所述待测血液样本对应的第二检测结果；基于维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C分别对应的标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测血液样本中维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C的浓度。 2.根据权利要求1所述的检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，所述检测条件中的色谱条件，包括： T3反相色谱柱；柱温为20～50℃；进样量为0.1～100μL；流速为0.1～0.5mL/min；流动相为甲醇和超纯水，所述超纯水中含有0.01％～0.2％甲酸和0.1～10mM甲酸铵，其中，所述流动相采用梯度洗脱。 3.根据权利要求1所述的检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，所述检测条件中的质谱条件，包括：采用正离子扫描模式；雾化气流量0.5～50L/min，加热气流量3～20L/min，离子源温度100～400℃，脱溶剂管温度30～300℃，加热块温度30～500℃，干燥气流量3～20L/min。 4.根据权利要求1所述的检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，所述内标物，包括：维生素B1同位素、维生素B2同位素、维生素B3同位素、维生素B5同位素、吡哆酸同位素、磷酸吡哆醛同位素、维生素B7同位素、维生素B9同位素、5-甲基四氢叶酸同位素、维生素B12同位素和维生素C同位素。 5.根据权利要求1所述的检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，维生素B1对应的标准曲线方程的两个变量分别为：维生素B1的色谱峰面积与维生素B1对应内标物的色谱峰面积的比值，以及维生素B1的浓度与维生素B1对应内标物的浓度的比值；维生素B2对应的标准曲线方程的两个变量分别为：维生素B2的色谱峰面积与维生素B2对应内标物的色谱峰面积的比值，以及维生素B2的浓度与维生素B2对应内标物的浓度的比值；维生素B3对应的标准曲线方程的两个变量分别为：维生素B3的色谱峰面积与维生素B3对应内标物的色谱峰面积的比值，以及维生素B3的浓度与维生素B3对应内标物的浓度的比值；维生素B5对应的标准曲线方程的两个变量分别为：维生素B5的色谱峰面积与维生素B5对应内标物的色谱峰面积的比值，以及维生素B5的浓度与维生素B5对应内标物的浓度的比值；吡哆酸对应的标准曲线方程的两个变量分别为：吡哆酸的色谱峰面积与吡哆酸对应内标物的色谱峰面积的比值，以及吡哆酸的浓度与吡哆酸对应内标物的浓度的比值；磷酸吡哆醛对应的标准曲线方程的两个变量分别为：磷酸吡哆醛的色谱峰面积与磷酸吡哆醛对应内标物的色谱峰面积的比值，以及磷酸吡哆醛的浓度与磷酸吡哆醛对应内标物的浓度的比值；维生素B7对应的标准曲线方程的两个变量分别为：维生素B7的色谱峰面积与维生素B7对应内标物的色谱峰面积的比值，以及维生素B7的浓度与维生素B7对应内标物的浓度的比值；维生素B9对应的标准曲线方程的两个变量分别为：维生素B9的色谱峰面积与维生素B9对应内标物的色谱峰面积的比值，以及维生素B9的浓度与维生素B9对应内标物的浓度的比值； 5-甲基四氢叶酸对应的标准曲线方程的两个变量分别为：5-甲基四氢叶酸的色谱峰面积与5-甲基四氢叶酸对应内标物的色谱峰面积的比值，以及5-甲基四氢叶酸的浓度与5-甲基四氢叶酸对应内标物的浓度的比值；维生素B12对应的标准曲线方程的两个变量分别为：维生素B12的色谱峰面积与维生素B12对应内标物的色谱峰面积的比值，以及维生素B12的浓度与维生素B12对应内标物的浓度的比值；维生素C对应的标准曲线方程的两个变量分别为：维生素C的色谱峰面积与维生素C对应内标物的色谱峰面积的比值，以及维生素C的浓度与维生素C对应内标物的浓度的比值。 6.根据权利要求2所述的检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，所述梯度洗脱，包括： 0.01～2.50min，甲醇和超纯水的体积比为0.5：99.5；2.50～8.50min，甲醇和超纯水的体积比为60：40；8.50～8.51min，甲醇和超纯水的体积比为100：0；8.51～10.50min，甲醇和超纯水的体积比为100：0；10.50～10.51min，甲醇和超纯水的体积比为0.5：99.5；10.51～15.00min，甲醇和超纯水的体积比为0.5：99.5。 7.根据权利要求1所述的检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，所述制备至少三种浓度的混合标准溶液，包括：制备标曲混合中间液：按不同比例混合维生素B1标准储备液、维生素B2标准储备液、维生素B3标准储备液、维生素B5标准储备液、吡哆酸标准储备液、磷酸吡哆醛标准储备液、维生素B7标准储备液、维生素B9标准储备液、5-甲基四氢叶酸标准储备液、维生素B12标准储备液和维生素C标准储备液，并用稀释液进行稀释，得到至少三种不同浓度的标曲混合中间液，并在-80℃避光保存；制备混合内标工作液：按不同比例混合维生素B1内标物储备液、维生素B2内标物储备液、维生素B3内标物储备液、维生素B5内标物储备液、吡哆酸内标物储备液、磷酸吡哆醛内标物储备液、维生素B7内标物储备液、维生素B9内标物储备液、5-甲基四氢叶酸内标物储备液、维生素B12内标物储备液和维生素C内标物储备液，并用稀释液进行稀释，得到混合内标工作液，并在-80℃避光保存；制备混合标准溶液：分别移取至少三种相同体积且不同浓度的标曲混合中间液，向移取的每一种浓度的所述标曲混合中间液内加入相同体积的所述混合内标工作液和相同体积的所述沉淀蛋白试剂，并在1500～3000rpm下涡旋混匀30s～1min，制成至少三种不同浓度的混合标准溶液。 8.根据权利要求7所述的检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，在所述向待测血液样本中加入沉淀蛋白试剂和与所述混合标准溶液中相同浓度的内标物之后，在所述进行高速离心处理之前，进一步包括：将待检测血液在离心速度3000～4000RPM下离心8～15min，将离心后的上清液作为待测血液样本，并在-80℃条件下保存；所述向待测血液样本中加入沉淀蛋白试剂和与所述混合标准溶液中相同量的内标物，并进行高速离心处理，包括：移取与所述混合标准溶液中相同量的所述混合内标工作液，向移取的所述混合内标工作液中加入所述待测血液样本，在1500～2500RPM的转速下涡旋震荡混合30s～1min，再加入所述沉淀蛋白试剂，在1200～2500RPM的转速下涡旋震荡混合5～15min后，再在10000～15000RPM的转速下高速离心5～15min。 9.根据权利要求7所述的检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，所述稀释液，包括：60％～90％甲醇水溶液。 10.根据权利要求1至9中任一所述的检测血液中水溶性维生素的方法，其特征在于，所述沉淀蛋白试剂，包括：3％～20％磺基水杨酸溶液。
所属类别：	发明专利