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原文传递一种人参提取物对照品、制备方法及其应用

专利名称：	一种人参提取物对照品、制备方法及其应用
摘要：	本发明提供一种对人参药材、人参提取物及其人参制剂中的化合物同时进行检测的人参提取物对照品及制备方法。所述人参提取物对照品为黄白色干燥粉末，其中所述人参总皂苷含量不低于50％，其中人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1，三者总和含量不低于20％，该人参提取物对照品可用于人参药材、人参处方的质量控制，对有效化合物定性定量的分析测定。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州万正药业有限公司
发明人：	许舜军;郭隆钢;许艺镌
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201810330859.7
公开号：	CN110376292A
代理机构：	北京君尚知识产权代理有限公司
代理人：	余长江
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	510663 广东省广州市萝岗区科学城芳草甸路2号
主权项：	1.一种人参提取物对照品，其特征在于，所述人参提取物对照品为黄白色干燥粉末，其中所述人参总皂苷含量不低于50％，其中人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1，三者总和含量不低于20％。 2.如权利要求1所述的一种人参提取物对照品，其特征在于，所述人参皂苷Rb1不低于5％、人参皂苷Re不低于5％、人参皂苷Rg1不低于10％。 3.如权利要求1所述的一种人参提取物对照品，其特征在于，所述的人参提取物对照品包括如下色谱峰的化合物：高效液相色谱峰或高效薄层色谱峰斑点比移值 4.如权利要求3所述的人参提取物对照品，其特征在于，所述的色谱峰1为人参皂苷Rg1，色谱峰2为人参皂苷Re，色谱峰3为人参皂苷Rb1；所述斑点8为人参皂苷Rg1，斑点6为人参皂苷Re，斑点3为人参皂苷Rb1。 5.如权利要求1所述的人参提取物对照品，其特征在于，是通过下述方法制备得到的：取人参药材用50-90％乙醇提取1-3次，每次2-120分钟，浓缩的提取物过氧化铝层析柱，后用50-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水溶解，通过聚苯乙烯层析柱或大孔树脂柱或C18柱子，分别用水、70-95％乙醇洗脱，收集70-95％乙醇洗脱液，浓缩得到提取物。 6.如权利要求5所述的人参提取物对照品，其特征在于，是通过下述方法制备得到的：取人参药材加入70％乙醇回流或闪式提取，每次提取2-60分钟，提取3次，滤液合并，浓缩，加入适量的氧化铝拌样，制成粉末状的样品，通过氧化铝层析柱，用50％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水溶解，通过聚苯乙烯层析柱分别用水、95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，浓缩干燥即得。 7.如权利要求1所述的人参提取物对照品，其特征在于，所述的人参提取物指纹图谱的建立，包括如下步骤：所述的化合物高效液相指纹是通过如下步骤得到的： (1)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品，用甲醇溶解即可； (2)供试品溶液的制备：取人参提取物对照品加甲醇超声，滤过，取续滤液即得； (3)测定法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，其色谱条件：DAD检测器、C18色谱柱、流动相：乙腈-水梯度洗脱、波长200-205nm、流速0.8-1.2mL/min；所述的化合物高效薄层色谱指纹是通过如下步骤得到的： (1)人参提取物对照品溶液：精密称取人参提取物对照品，加入甲醇超声提取，取滤液作为提取物对照品溶液； (2)参照物溶液：精密称取人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品，用甲醇溶解即可； (3)色谱条件：高效薄层色谱板、展开剂：氯仿：乙酸乙酯：甲醇：水＝15:40:22：10，低温放置取下层溶液作为展开剂，展开后将薄层板放于空气中干燥，喷加10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热3-4min，在UV366nm下检视荧光，在日光下检视红色皂苷条带，拍照记录。 8.如权利要求7所述的人参提取物对照品，其特征在于，所述的化合物高效液相指纹是通过如下步骤得到的： (1)供试品溶液的制备取人参提取物对照品，精密称定，加甲醇超声处理15min，滤过，配制成2mg/ml浓度的溶液，摇匀，滤过，取续滤液过0.22μm滤膜即得； (2)参照物溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1，Re，Rg1，用甲醇溶解制成0.2mg/mL的对照品溶液； (3)测定法分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液5μl，10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；色谱条件：色谱仪器：高效液相色谱仪检测器：DAD检测器色谱柱：C184.6×250mm，5μm。试剂：乙腈-水所述的化合物高效薄层色谱指纹是通过如下步骤得到的： (1)人参提取物对照品溶液精密称取人参提取物对照品，加入甲醇超声提取15分钟，定容，配制成10mg/ml浓度的溶液，取滤液作为提取物对照品溶液； (2)参照物溶液精密称取人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品，用甲醇配制成0.2mg/ml的溶液即可； (3)色谱条件：薄层板:HPTLC G60预制板点样:提取物对照品点样1μl，参照物溶液点样2μl，条带状点样宽10mm。点样后的薄层板需要真空干燥30min；展开剂:氯仿：乙酸乙酯：甲醇：水＝15:40:22：10放置于4℃环境中分层取下层溶液作为展开剂；展开方式：展开上行8.5cm；温度：15℃-24℃，湿度30％-65％；检视：展开后将薄层板放于空气中干燥，喷加10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热3-4min；在UV366nm下检视荧光，在日光下检视红色皂苷条带，拍照记录。 9.一种人参药材的真伪鉴别的方法，其特征在于，包括高效液相色谱法和高效薄层色谱法， (1)对照品制备：取人参提取物对照品，加入甲醇超声提取，定容，即可； (2)供试品溶液的制备：人参药材甲醇或乙醇回流，过滤，滤液蒸干；残渣用少量70-100％的甲醇或乙醇溶解，通过的中性氧化铝柱中，用40-60％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干；残渣用少量水溶解，通过聚苯乙烯层析柱或大孔树脂小柱或C18柱子，先用水洗脱，再用甲醇洗脱,收集甲醇洗脱液，蒸干；残渣用甲醇溶解，即可； (3)测定方法：采用高效薄层色谱法和/或高效液相色谱法检测真伪及测定人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量；所述步骤(3)高效液相色谱法，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，其色谱条件：DAD检测器、C18色谱柱、流动相：乙腈-水梯度洗脱、波长200-205nm、流速0.8-1.2mL/min；所述步骤(3)高效薄层色谱法高效薄层色谱板、展开剂：氯仿：乙酸乙酯：甲醇：水＝15:40:22：10，低温放置取下层溶液作为展开剂，展开后将薄层板放于空气中干燥，喷加10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热3-4min，在UV366nm下检视荧光，在日光下检视红色皂苷条带，拍照记录。 10.如权利要求9所述的一种人参药材的真伪鉴别的方法，其特征在于，包括高效液相色谱法和高效薄层色谱法，所述高效液相色谱法，包括步骤如下： (1)对照品制备：取人参提取物对照品，加入甲醇超声提取，定容，配制成10mg/ml浓度的溶液，通过0.45μm滤膜，取滤液作为提取物对照品溶液；精密称取人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品，用甲醇溶解即可； (2)人参药材供试品溶液的制备：精密称取人参药材粉末，加甲醇加热回流1h，过滤，滤液蒸干；残渣用少量90％的甲醇溶解，通过已准备好的中性氧化铝柱中，用50％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干；残渣用少量水溶解，通过大孔树脂柱，先用水充分洗脱至无色，再用甲醇洗脱约收集甲醇洗脱液，蒸干；残渣用甲醇溶解，定容,作为供试品溶液。 (3)测定方法：采用高效薄层色谱法和/或高效液相色谱法检测真伪及测定人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量；其中高效液相色谱法：色谱仪器：高效液相色谱仪检测器：DAD检测器色谱柱：C184.6×250mm，5μm。流动相：乙腈-水梯度洗脱其中高效薄层色谱法薄层板，HPTLC G60预制板点样，提取物对照品点样1μl，药材供试品溶液点样量为0.5μl，条带状点样宽10mm。点样后的薄层板需要真空干燥30min。展开剂，氯仿：乙酸乙酯：甲醇：水＝15:40:22：10放置于4℃环境中分层取下层溶液作为展开剂；展开方式，展开上行8.5cm；温度：15℃-24℃，湿度30％-65％；检视：展开后将薄层板放于空气中干燥，喷加10％硫酸乙醇溶液，于105℃加热3-4min。在UV366nm下检视荧光，在日光下检视红色皂苷条带，拍照记录。
所属类别：	发明专利