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原文传递用于生物标志物灵敏检测的基于竞争性非共价相互作用的质谱检测方法

专利名称：	用于生物标志物灵敏检测的基于竞争性非共价相互作用的质谱检测方法
摘要：	本发明公开了一种用于生物标志物灵敏检测的基于竞争性非共价相互作用的质谱检测方法。本发明利用了质谱检测灵敏度高，检测限低，高通量和能提供准确的分子质量或分子结构信息的优势，克服了传统生物标志物检测灵敏度低，抗干扰性差的缺点。本发明由于其良好的灵敏度，对检测物微量变化的响应度高，以及对复杂基质的抗干扰性高的优点，可以用于实际病人样本的检测，为临床癌症的诊断治疗提供可靠的分析手段。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国科学院化学研究所
发明人：	聂宗秀;韩静;占铃鹏;薛晋娟;孙洁
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201810329532.8
公开号：	CN110376382A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	关畅;吴爱琴
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100190 北京市海淀区中关村北一街2号
主权项：	1.一种用于生物标志物检测的基于竞争性非共价相互作用的质谱检测方法，包括下述步骤： 1)根据待检测的生物标志物设计核酸适配体； 2)将核酸适配体与金纳米颗粒一起孵育，得到核酸适配体-金纳米颗粒结合体； 3)将所述核酸适配体-金纳米颗粒结合体分别与一系列已经浓度的生物标志物标准品、质量标签共同孵育，分离，对得到的固体分别进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析，得到一系列对应于已知浓度的生物标志物的与金纳米颗粒结合的质量标签的信号，建立标准的生物标志物的浓度与质量标签的信号的对应关系； 4)将未知浓度的生物标志物与步骤2)中的所述核酸适配体-金纳米颗粒结合体和质量标签共同孵育，分离，对得到的固体进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析，得到对应于未知浓度的生物标志物的金纳米颗粒结合的质量标签的信号，根据步骤3)中的标准的生物标志物的浓度与质量标签的信号的对应关系，得到生物标志物的浓度。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：生物标志物为前列腺癌特异性抗原。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述待检测的生物标志物为前列腺癌特异性抗原时，所述核酸适配体的序列为CGT CGT ATT AAA GCT CGC CAT CAA ATA GCTTT。 4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述金纳米颗粒的粒径分布在11-17nm之间，平均尺寸为13nm；紫外特征吸收最大值在520nm波长处；所述核酸适配体与金纳米颗粒的孵育温度为室温，时间为12-24；所述核酸适配体与金纳米颗粒的孵育优选在酸性pH条件下进行；或，所述核酸适配体与金纳米颗粒的孵育优选在缓冲溶液中进行。 5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述质量标签为具有良好的解析与离子化特性，可以在MALDI MS中出现信号的物质。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述质量标签为腺嘌呤。 7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于：核酸适配体-金纳米颗粒结合体与生物标志物、质量标签共同孵育的温度为室温，时间为1-3h。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于：所述质谱分析的条件为：电压：加速电压：19.000kV；延迟引出电压：14.920kV；反射器电压：20.000kV；透镜电压：7.000kV；频率：1.000Hz；激光器能量：20％；累加次数：100次；正离子模式。 9.一种用于检测生物标记物的试剂盒，包括金纳米颗粒、与待检测生物标记物匹配的核酸适配体、质量标签；所述质量标签为具有良好的解析与离子化特性，可以在MALDI MS中出现信号的物质。 10.权利要求9所述的试剂盒在制备检测生物标志物的产品中的应用。
所属类别：	发明专利