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原文传递一种测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器及其制备方法与应用

专利名称：	一种测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器及其制备方法与应用
摘要：	本发明公开了一种测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器及其制备方法与应用，所述的测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器，其基底电极表面依次经过羧基化多壁碳纳米管、乙烯基二茂铁‑N‑羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯电聚合和甲胎蛋白抗原抗体修饰即得。与现有技术相比，本发明具有如下优点：(1)MWCNTs具有比表面积大、吸附力强、导电性能好等优点；(2)制备的电化学免疫传感器具有灵敏度高，反应时间短，组装简单，信号强，线性范围宽等优点，并实现了对肿瘤标志物AFP的痕量检测；(3)该传构建方法也可用于其他免疫蛋白或致病抗原物质的测定，在临床方面有广泛的应用价值；(4)本发明的免疫生物传感器操作简单，成本低。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	东南大学
发明人：	沈艳飞;吉格儿;潘登
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201910664192.9
公开号：	CN110398585A
代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	肖明芳
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	211102 江苏省南京市江宁区东南大学路2号
主权项：	1.一种测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器的制备方法，其特征在于，基底电极表面依次经过羧基化多壁碳纳米管、乙烯基二茂铁-N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯电聚合和甲胎蛋白抗原抗体修饰即得。 2.根据权利要求1所述测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)将基底电极进行打磨、抛光、清洗； (2)将羧基化多壁碳纳米管加入到水中，超声至分散均匀，再滴加到步骤(1)处理后的基底电极表面，18～40℃避光干燥1～3h； (3)将乙烯基二茂铁-N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯溶液电聚合到步骤(2)处理后的基底电极的表面； (4)将步骤(3)已经电聚合后的工作电极取出，并用PBS清洗；并滴加甲胎蛋白包被抗体于清洗后的基底电极表面，1～10℃放置6～18h，用PBS清洗，室温干燥； (5)滴加牛血清白蛋白溶液于步骤(4)处理后的基底电极表面，室温放置1～15h，用PBS清洗，室温干燥； (6)将甲胎蛋白抗原滴加于步骤(5)处理后的基底电极表面，30～40℃，避光保存0.5～2h，干燥，用PBS缓冲液清洗。 3.根据权利要求1或2所述的测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器的制备方法，其特征在于，所述基底电极为玻碳电极。 4.根据权利要求1或2所述的测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的羧基化多壁碳纳米管的制备方法如下： (Ⅰ)将多壁碳纳米管加入到混合酸中，于65～90℃超声1～3.5h，再加热搅拌1～5h，离心分离，得到沉淀物； (Ⅱ)将步骤(Ⅰ)得到的沉淀物水洗至中性，或加入稀氢氧化钠洗涤至中性，干燥，即得羧基化多壁碳纳米管。 5.根据权利要求4所述的测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅰ)中，所述的混合酸为浓硫酸与浓硝酸的混合物，体积比为3:1～1:3；控制混酸的添加量，使多壁碳纳米管的浓度为3～7mg/mL；所述的加热指的是加热至温度为24～26℃。 6.根据权利要求1或2所述的测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的乙烯基二茂铁-N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯的制备方法如下：取乙烯基二茂铁、N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯和室温离子液体于玛瑙研钵中，均匀研磨5～8分钟直至溶液中无清晰可见颗粒物，得到乙烯基二茂铁-N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯溶液。 7.根据权利要求6所述的测定甲胎蛋白抗原的免疫生物传感器的制备方法，其特征在于，乙烯基二茂铁和N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯的摩尔质量比为1:10～10:1优选2:1，控制室温离子液体的添加量，使乙烯基二茂铁浓度为1～15mg/mL，N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯的浓度为1～5mg/mL。 8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的羧基化多壁碳纳米管的浓度为0.2～4mg/mL，所述的羧基化多壁碳纳米管的体积为2～8μL；步骤(3)中，所述的电聚合为连续循环伏安法，其扫描范围为(-2.4)～(-1)V，扫描速率为0.1～0.5V/s，扫描圈数为10～17圈，乙烯基二茂铁-N-羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯溶液的用量为1～5mL；步骤(4)中，所述的甲胎蛋白包被抗体的浓度为12～20μg/mL，滴加量为1～10μL；步骤(5)中，所述的牛血清白蛋白溶液的质量分数为0.2～2％，滴加量为1～10μL；步骤(6)中所述的甲胎蛋白抗原的浓度为10ng/mL～10μg/mL，滴加量为5～10μL。 9.权利要求1～8任意一项所述的制备方法制备得到的免疫生物传感器。 10.权利要求9所述的免疫生物传感器在定量检测甲胎蛋白抗原中的应用。
所属类别：	发明专利