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原文传递 β-内酰胺酶敏感型纳米探针及其制备方法和应用

专利名称：	β-内酰胺酶敏感型纳米探针及其制备方法和应用
摘要：	β‑内酰胺酶敏感型纳米探针及其制备方法和应用，该纳米探针是以两亲性生物素‑聚乙二醇‑内酰胺‑十八胺为载体材料制备的纳米粒和包载于该聚合物纳米粒中的报告多肽构成。通过生物素与链霉亲和素琼脂糖珠反应，将纳米探针固定在琼脂糖珠上。当存在β‑内酰胺酶时，纳米探针解体释放出多肽，然后通过液相质谱联用检测报告多肽，即可检测样品中β‑内酰胺酶的量，从而检测耐药菌。该纳米探针具有制备简单、灵敏度、准确和精密度高，且可显著放大β‑内酰胺酶的信号等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京医科大学
发明人：	陈芸;孙建国;邵华;朱建华;白云飞;胡琳璘;牛一民;彭英
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910699054.4
公开号：	CN110441527A
代理机构：	南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：	唐循文
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	211166江苏省南京市江宁区龙眠大道101号
主权项：	1.一种β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于制备步骤为：按比例，将5mg两亲性聚合物生物素-聚乙二醇-（β-内酰胺）-硬脂胺（Biotion-PEG-LA-C18）和1 mg报告多肽共同溶入2 mL二甲基亚砜中，然后将所得混合溶液逐滴加入到10 mL水溶液中，搅拌，透析除去二甲基亚砜，过220μm膜即得到纳米探针。 2.根据权利要求1所述所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于所述报告多肽的序列为：AVLGVDPFR、AVVGVDPFR、AVLKGDF和GVDGFG。 3.根据权利要求1所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于所述Biotion-PEG-LA-C18重均分子量2000-3000。 4.根据权利要求1所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于所述Biotion-PEG-LA-C18和报告多肽质量比为5:1。 5.根据权利要求1所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于所述Biotion-PEG-LA-C18的制备方法为：将生物素-聚乙二醇与β-内酰胺共价结合得到生物素-聚乙二醇-（β-内酰胺），然后在与硬脂胺共价结合得到最终两亲性聚合物。 6.根据权利要求5所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的制备方法，其特征在于制备步骤为：取1.0 mg重均分子量为2000 Da的生物素-聚乙二醇、0.2 mg β-内酰胺、0.1 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.15 mg N-羟基硫代琥珀酰亚胺共同溶入50 mL甲酰胺中，30 ℃，500 rpm搅拌反应24小时；然后将反应液转移到截留分子量：1000 Da的透析袋中，用去离子水透析24小时，然后冻干得到生物素-聚乙二醇-（β-内酰胺）；称取0.5 mg生物素-聚乙二醇-（β-内酰胺）、0.1 mg硬脂胺、0.2 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.1 mg N-羟基硫代琥珀酰亚胺共同溶入50 mL二甲基亚砜中，30 ℃，500rpm搅拌反应24小时，然后将反应液转移到截留分子量：1000 Da的透析袋中，用二甲基亚砜透析12小时，然后用去离子水透析24小时，冻干得到生物素-聚乙二醇-（β-内酰胺）-硬脂胺。 7.权利要求1-6任一所述制备方法制得的β-内酰胺酶敏感型纳米探针。 8.权利要求7所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针的固定方法，其特征在于通过生物素与链霉亲和素反应将纳米探针固定在琼脂糖磁珠上，包括以下步骤：将磁珠和β-内酰胺酶敏感型纳米探针按体积比2:1在pH 7.4磷酸缓冲液中孵育2小时，并每隔0.5小时搅拌一次，充分混匀磁珠和纳米探针，2小时后洗涤除去未固定的纳米探针。 9.权利要求7所述β-内酰胺酶敏感型纳米探针在制备检测尿液中β-内酰胺酶试剂盒中的应用。
所属类别：	发明专利