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原文传递一种脂肪细胞的染色方法及其应用

专利名称：	一种脂肪细胞的染色方法及其应用
摘要：	本发明公开一种脂肪组织染色方法，包括：a.用TritonX‑100处理脂肪组织冷冻切片；b.除去TritonX‑100；c.用戊二醛固定切片；d.用油红O染色切片；e.对切片脱色；f.用DMSO处理切片；g.除去DMSO；h.用考马斯亮蓝R250染色切片；i.脱色。用于对细胞骨架染色。本发明公开另一种脂肪组织染色方法，包括：a.用DMSO处理脂肪组织冷冻切片；b.除去DMSO；c.用TritonX‑100处理切片；d.除去TritonX‑100；e.用戊二醛固定切片；f.除去戊二醛；g.用考马斯亮蓝R250染色切片；h.脱色。本发明还公开了如上两种方法色两种试剂盒与应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	阜阳师范大学
发明人：	屈长青;孙晶晶;杨梅;姬云涛;岳少云;张尚荣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910797148.5
公开号：	CN110426264A
代理机构：	北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	张雪
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	236037 安徽省阜阳市清河西路100号
主权项：	1.一种脂肪组织染色方法，所述染色方法包括如下步骤： a.用TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片； b.除去所述TritonX-100； c.用戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片； d.用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片； e.对所述脂肪组织冷冻切片脱色； f.用DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片； g.除去DMSO； h.用考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片； i.脱色。 2.如权利要求1所述的脂肪组织染色方法，其特征在于：在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片；优选，所述脂肪组织冷冻切片厚度30-40μm；优选，在步骤a中，用0.8-1.2％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片15-25min；优选，在步骤b中，用M缓冲液除去所述TritonX-100；优选，在步骤b中，用M缓冲液洗1-3次，每次3-6min；优选，在步骤c中，用2.5-3.5％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片20-40min；优选，在步骤d中，用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片8-12min；优选，在步骤e中，用异丙醇对所述脂肪组织冷冻切片脱色；优选，所述异丙醇的浓度为55-65％，处理时间为冲洗至洗去浮色；优选，在步骤f中，用45-55％％DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片5-10分钟；优选，在步骤g中，用磷酸缓冲液漂洗除去DMSO；优选，在步骤h中，用0.15-0.25％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片25-35min；优选，在步骤i中，蒸馏水洗脱色。 3.如权利要求1或2所述的脂肪组织染色方法，其特征在于：在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片三次，每次一分钟；优选，所述脂肪组织冷冻切片厚度35μm；优选，在步骤a中，用1％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片20min；优选，在步骤b中，用M缓冲液除去所述TritonX-100三次，每次5min；优选，在步骤b中，用M缓冲液洗三次，每次5min；优选，在步骤c中，用3％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片30min；优选，在步骤d中，用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片10min；优选，在步骤f中，用50％的DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片8分钟；优选，在步骤g中，用磷酸缓冲液漂洗一次除去DMSO；优选，在步骤h中，用0.2％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片30min；优选，在步骤i中，蒸馏水洗两次脱色；优选，在步骤i后，将样品置于载玻片上加盖玻片。 4.一种用于脂肪组织染色的试剂盒，所述试剂盒包括：用于盛装或盛装有磷酸缓冲液的试剂瓶；用于盛装或盛装有TritonX-100的试剂瓶；用于盛装或盛装有M缓冲液洗的试剂瓶；用于盛装或盛装有戊二醛的试剂瓶；用于盛装或盛装有油红O的试剂瓶；用于盛装或盛装有异丙醇的试剂瓶；用于盛装或盛装有DMSO的试剂瓶；用于盛装或盛装有考马斯亮蓝R250的试剂瓶；优选，所述试剂盒用于权利要求1-3中任一项所述的脂肪组织染色方法；优选，所述试剂盒还包括：用于盛装或盛装有蒸馏水的试剂瓶；优选，所述试剂盒还包括：载玻片；优选，所述试剂盒还包括：盖玻片。 5.一种脂肪组织染色方法，所述染色方法包括如下步骤： a.用DMSO处理脂肪组织冷冻切片； b.除去DMSO； c.用TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片； d.除去所述TritonX-100； e.用戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片； f.除去戊二醛； g.用考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片； h.脱色。 6.如权利要求5所述的脂肪组织染色方法，其特征在于：在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片；优选，所述脂肪组织冷冻切片厚度30-40μm；优选，在步骤a中，用45-55％的DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片5-10分钟；优选，在步骤c中，用0.8-1.2％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片15-25min；优选，在步骤d中，用M缓冲液除去所述TritonX-100；优选，在步骤d中，用M缓冲液洗1-3次，每次3-6min；优选，在步骤e中，用2.5-3.5％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片20-40min；优选，在步骤f中，用磷酸缓冲液漂洗除去戊二醛；优选，在步骤g中，用0.15-0.25％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片25-35min；优选，在步骤h中，蒸馏水洗脱色。 7.如权利要求5或6所述的脂肪组织染色方法，其特征在于：在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片三次，每次一分钟；优选，所述脂肪组织冷冻切片厚度35μm；优选，在步骤a中，用50％的DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片8分钟；优选，在步骤c中，用1％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片20min；优选，在步骤d中，用M缓冲液除去所述TritonX-100三次，每次5min；优选，在步骤e中，用3％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片30min；优选，在步骤f中，用磷酸缓冲液漂洗三次除去戊二醛；优选，在步骤g中，用0.2％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片30min；优选，在步骤h中，蒸馏水洗两次脱色；优选，在步骤h后，将样品置于载玻片上加盖玻片。 8.一种用于脂肪组织染色的试剂盒，所述试剂盒包括：用于盛装或盛装有磷酸缓冲液的试剂瓶；用于盛装或盛装有DMSO的试剂瓶；用于盛装或盛装有TritonX-100的试剂瓶；用于盛装或盛装有M缓冲液洗的试剂瓶；用于盛装或盛装有戊二醛的试剂瓶；用于盛装或盛装有考马斯亮蓝R250的试剂瓶；优选，所述试剂盒用于权利要求5-7中任一项所述的脂肪组织染色方法；优选，所述试剂盒还包括：用于盛装或盛装有蒸馏水的试剂瓶；优选，所述试剂盒还包括：载玻片；优选，所述试剂盒还包括：盖玻片。 9.如权利要求1-3中任一项所述的方法，或者权利要求4所述的试剂盒在同时表征脂肪细胞脂滴与细胞骨架或所述脂肪细胞脂滴与所述细胞骨架关系中的应用或用途。 10.如权利要求5-7中任一项所述的方法，或者权利要求8所述的试剂盒在表征脂肪细胞的细胞骨架中的应用或用途。
所属类别：	发明专利