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原文传递一种基于无酶催化自组装的单个量子点荧光纳米传感器及其制备方法和应用

专利名称：	一种基于无酶催化自组装的单个量子点荧光纳米传感器及其制备方法和应用
摘要：	本发明涉及一种基于无酶催化自组装的单个量子点荧光纳米传感器及其制备方法和应用，由两个发夹DNA探针、链霉亲和素蛋白修饰的量子点组成，其中一个发夹DNA探针为生物素标记的捕获探针，另一个发夹DNA探针为荧光团花菁5标记的信号探针，两个发夹DNA探针组装在链霉亲和素蛋白修饰的量子点(SA‑QDs)表面，形成单个量子点荧光纳米传感器。在检测癌细胞中的内源性microRNA和患者血液样本中的循环microRNA中具有应用，具有高选择性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东师范大学
发明人：	张春阳;马飞;张倩
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201910677378.8
公开号：	CN110398481A
代理机构：	济南圣达知识产权代理有限公司
代理人：	张晓鹏
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250014 山东省济南市历下区文化东路88号
主权项：	1.一种基于无酶催化自组装的，其特征在于：由两个发夹DNA探针、链霉亲和素蛋白修饰的量子点组成，其中一个发夹DNA探针为生物素标记的捕获探针，另一个发夹DNA探针单个量子点荧光纳米传感器为荧光团花菁5标记的信号探针，两个发夹DNA探针组装在链霉亲和素蛋白修饰的量子点表面，形成单个量子点荧光纳米传感器。 2.根据权利要求1所述的单个量子点荧光纳米传感器，其特征在于：所述发夹捕获探针长度为54nt，其碱基序列为：5'-ATA AGC TAG CTA GGTTTCAACATC TAG CTTATC AGACCGATGTTG AAA CCTAGC-3'。 3.根据权利要求1所述的单个量子点荧光纳米传感器，其特征在于：所述发夹信号探针长度为52nt，其碱基序列为：5'-TCAACATC A GTCTGATAAGCT AGA TGTTGAAAC CTAGCTAGCTTATCAGAC T-3'。 4.根据权利要求1所述的单个量子点荧光纳米传感器，其特征在于：量子点为605QDs。 5.根据权利要求1所述的单个量子点荧光纳米传感器，其特征在于：还包括反应缓冲溶液，组成为三羟甲基氨基甲烷-盐酸、氯化钠、氯化钾；优选的，反应缓冲液的组成为18-22毫摩尔每升的三羟甲基氨基甲烷-盐酸，135-145毫摩尔每升的氯化钠，4-6毫摩尔每升的氯化钾；优选的，pH为7.5。 6.权利要求1至5任一所述的单个量子点荧光纳米传感器的制备方法，其特征在于：具体步骤为： 1)将捕获探针和信号探针分别在反应缓冲液中孵育，分别得到发夹结构的捕获探针和信号探针； 2)将发夹结构的捕获探针和信号探针混合进行孵育，然后加入链霉亲和素蛋白修饰的量子点后继续孵育，得到单个量子点荧光纳米传感器；优选的，反应缓冲液由18-22毫摩尔每升的三羟甲基氨基甲烷-盐酸，135-145毫摩尔每升的氯化钠，4-6毫摩尔每升的氯化钾，缓冲液的pH为7.5；优选的，步骤1)的孵育条件为：90-100℃下孵育4-6分钟；优选的，发夹结构的捕获探针溶液、发夹结构的信号探针溶液、反应缓冲液、链霉亲和素蛋白修饰的量子点的体积比为19-21：1.7-1.9：2：1：2；发夹结构的捕获探针溶液的浓度为2微摩尔每升，发夹结构的信号探针溶液的浓度为2微摩尔每升；优选的，步骤2)的第一次孵育的条件为：37℃下孵育2.5-3.5小时；第二次孵育的条件为：37℃下孵育4-6分钟。 7.权利要求1至5任一所述的单个量子点荧光纳米传感器在检测癌细胞中的内源性microRNA或患者血液样本中的循环microRNA中的应用。 8.权利要求1至5任一所述的单个量子点荧光纳米传感器检测循环microRNA的方法，其特征在于：具体步骤为： (1)将待测样品加入所述纳米传感器的反应体系中进行反应； (2)向步骤(1)中加入链霉亲和素蛋白修饰的量子点进行孵育反应； (3)对Cy5的荧光信号进行检测，以定量检测待测样品中的microRNA。 9.根据权利要求8所述的检测循环microRNA的方法，其特征在于：步骤(1)中反应温度为36-38℃，反应时间为2.5-3.5h。 10.根据权利要求8所述的检测循环microRNA的方法，其特征在于：步骤(2)中孵育反应温度为36-39℃，反应时间为6-13min。
所属类别：	发明专利