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原文传递补肺胶囊质量标准提升检测方法

专利名称：	补肺胶囊质量标准提升检测方法
摘要：	本发明公开了一种补肺胶囊质量标准提升检测方法。本发明构建了一套全新的质量标准检测方法，该方法更为科学，需保留主药黄芪、党参、白术等的有效成分多糖成分及黄芪甲苷，增加黄芪甲苷及总多糖为定量控制指标，有利于对其质量进行科学分析和评估，为提高产品质量和保障疗效提供数据支持和方法验证，并为该制剂建立更加科学全面的质量标准。并可获得中药新药有效的质量控制标准及安全性评价的重要内容，为补肺胶囊临床前研究提供可靠依据，完成新药“补肺胶囊”的临床前研究。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵州中医药大学第二附属医院
发明人：	梁会;陈礼大;熊静;王霞;韩云霞;杨亮;蒋玲;杨仁惠;屈相玲;熊成欢
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910782628.4
公开号：	CN110426478A
代理机构：	贵阳中新专利商标事务所
代理人：	李亮;程新敏
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	550003 贵州省贵阳市云岩区飞山街83号
主权项：	1.一种补肺胶囊质量标准提升检测方法，其特征在于：包括如下步骤： 1)补肺胶囊标准品的制备： a)将黄芪229g、党参172g、土炒白术138g、盐巴戟天138g、盐补骨脂138g、肉苁蓉138g、陈皮103g、法半夏103g、炒紫苏子103g、北沙参138g、醋南五味子103g及炙甘草57g混合均匀； b)将混合药材用水完全浸没，并浸泡1小时后，将混合药材加8倍质量的水进行煎煮，每次煎煮2小时，共煎煮3次，煎煮后的药液过滤，最后将3次煎煮的滤液合并； c)将滤液60℃条件下减压浓缩至60℃下的相对密度为1.2～1.35的稠膏，然后向稠膏中加入二氧化硅混匀； d)将上述混合物在80℃干燥，粉碎过60目筛，加入二氧化硅混匀，装入胶囊制成1500粒，获得补肺胶囊标准品； 2)补肺胶囊标准品的定性鉴别： a)随机从制备获得的补肺胶囊标准品中取样，取胶囊的内容物4g，加甲醇30ml，超声处理30min；再进行滤过，将滤液蒸干，残渣加水30ml使其完全溶解，用乙酸乙酯30ml振摇提取，将乙酸乙酯层蒸干，再用甲醇2ml溶解，作为供试品溶液A；另取黄芪对照药材1g，加甲醇30ml，超声处理30min；再进行滤过，将滤液蒸干，残渣加水30ml使其完全溶解，用乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯层蒸干，用甲醇1ml溶解，作为对照药材溶液A；按照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法进行试验；分别取供试品溶液A及对照药材溶液A各5μl，然后分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇的体积比为12:1:1；将其展开、取出、晾干，然后置于氨气中熏10min，在波长为254nm紫外光下检视供试品溶液A的色谱与对照药材溶液A的色谱相应的位置上，是否显有相同颜色的荧光斑点； b)随机从制备获得的补肺胶囊标准品中取样，取胶囊的内容物4g，加甲醇30ml，超声处理30min；再进行滤过，将滤液蒸干，残渣加水30ml使其完全溶解，用乙酸乙酯30ml振摇提取，乙酸乙酯层蒸干，用甲醇2ml溶解，作为供试品溶液B；另取紫苏子对照药材粉末1g，加甲醇30ml，超声处理30min，再进行滤过，将滤液蒸干，用甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液B；按照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法进行试验；取供试品溶液B 3μl，取对照药材溶液B1μl，将供试品溶液B与对照药材溶液B分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，石油醚的沸点为60～90℃，石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸的体积比为22:2:0.2；展开、取出、晾干，喷以10％质量浓度的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在波长为365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在供试品溶液B的色谱与对照药材溶液B的色谱相应的位置上，是否显有相同颜色的荧光斑点； c)随机从制备获得的补肺胶囊标准品中取样，取胶囊的内容物4g，加甲醇30ml，超声处理30分钟；再进行滤过，将滤液蒸干，残渣加水20ml使其完全溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去醚液，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次30ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使其完全溶解，作为供试品溶液C；另取甘草对照药材1g，按照供试品溶液C相同的方法制成对照药材溶液C；按照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法进行试验；取供试品溶液C 5μl、取对照药材溶液C 2μl，将供试品溶液C与取对照药材溶液C分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇为展开剂，三氯甲烷与甲醇的体积比为9:3；展开、取出、晾干，喷以10％质量浓度的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在波长为365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在供试品溶液C的色谱与对照药材溶液C的色谱相应的位置上，是否显有相同颜色的荧光斑点； d)随机从制备获得的补肺胶囊标准品中取样，取胶囊的内容物8g，加乙酸乙酯50ml，50℃超声提取1小时；再进行滤过，将滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液D；取补骨脂对照药材0.4g，加乙酸乙酯20ml，超声处理1小时；再进行滤过，将滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使其完全溶解，作为对照药材溶液D；按照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法进行试验；取供试品溶液D10～15μl、对照药材溶液D 2μl，将供试品溶液与对照药材溶液D分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯为展开剂，正已烷与乙酸的体积比为4:1；展开、取出、晾干，喷以10％质量浓度的氢氧化钾甲醇溶液，在波长为365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在供试品溶液D的色谱与对照药材溶液D的色谱相应的位置上，是否显有相同颜色的荧光斑点； e)随机从制备获得的补肺胶囊标准品中取样，取胶囊的内容物2g，加硅藻土2g，研细，加甲醇25ml，超声处理30分钟；再进行滤过，将滤液水浴蒸干后，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液E；另取陈皮对照药材0.5g及硅藻土0.5g，按照供试品溶液E的制备方法制成对照药材溶液E；按照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法进行试验；分别取供试品溶液E和对照药材溶液E各3～5μl，将供试品溶液E和对照药材溶液E分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水的上层溶液为展开剂，乙酸乙酯-甲醇-水的体积比为6:1:3；展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在波长为365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在供试品溶液E的色谱与对照药材溶液E的色谱相应的位置上，是否显有相同颜色的荧光斑点； f)随机从制备获得的补肺胶囊标准品中取样，取胶囊的内容物2g，加70％乙醇20ml，浸渍1小时，不时振摇，离心，取上清液，水浴蒸干，残渣加水10ml溶解，置于分液漏斗内，用乙酸乙酯提取2次，每次10ml，弃去，再用正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液F；另取肉苁蓉对照药材1g，加30ml水加热回流30分钟后，离心滤过，取上清液，置分液漏斗内，正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液F；按照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法进行试验；吸取供试品溶液F及对照药材溶液F各2μl，将供试品溶液F及对照药材溶液F分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-醋酸-水为展开剂，甲醇-醋酸-水的体积比为2:1:7；展开、取出、晾干，在波长为365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在供试品溶液F的色谱与对照药材溶液F的色谱相应的位置上，是否显有相同颜色的荧光斑点； 3)含量测定 a)黄芪甲苷检测对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，即得对照品溶液；供试品溶液的制备：随机取将囊内容物8g，精密称定，置100ml离心管中，加水30ml，摇匀使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20mL，再用20ml蒸馏水洗涤1次，弃去水洗液，合并两次氨洗液，置水浴锅上挥至无氨味，用水饱和正丁醇萃取2次，每次20ml，弃去洗液，合并正丁醇液，正丁醇液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算；按照高效液相色谱法通则0512测定；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相，乙腈-水的体积比为32∶68；蒸发光散射检测器检测，理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000；最终每粒胶囊含黄芪以黄芪甲苷C41H68O14计，不得少于56μg； b)多糖检测对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含0.14mg的溶液，即得对照品溶液；标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml，分别置15ml具塞试管中，各加水补至1.0ml，精密加入4％苯酚溶液1ml，摇匀，精密加硫酸5ml，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法通则0401，在485nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备：随机取将囊内容物1g，精密称定，加水溶解，转移至250ml量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取5mL，置50ml离心管中，精密加入无水乙醇20ml，摇匀，冷藏静置过夜，取出，离心，离心转速为每分钟4000转，10分钟，弃去上清液，沉淀加80％乙醇10ml洗涤一次，同法离心，弃去上清液，沉淀加水溶解，转移至50ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液；测定法：精密量取供试品溶液1ml，置15ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入4％苯酚溶液1ml”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算，即得；每粒胶囊含多糖以无水葡萄糖C6H12O6计，不得少于55mg；以上所有检测后，全部检测全部通过，则检测合格。 2.根据权利要求1所述的补肺胶囊质量标准提升检测方法，其特征在于：步骤1)的步骤c)中，向稠膏中加入二氧化硅为65-70g。
所属类别：	发明专利