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原文传递一种检测尿液中皮质醇的方法

专利名称：	一种检测尿液中皮质醇的方法
摘要：	本发明提出了一种检测尿液中皮质醇浓度的方法。更具体地说，本发明提出了以同位素内标为校准品，以尿液中肌酐含量来均一化不同个体的尿液浓度差异，结合UPLC‑MS/MS技术检测尿液中皮质醇浓度的方法。本发明提供的方法能够在检测尿液中皮质醇浓度的同时检测肌酐浓度，由此可以归一化皮质醇浓度，使得尿液中的皮质醇能够为评估人体压力水平提供技术基础，并为个性化干预调节人体压力状况提供有效信息和依据。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳市绿航星际太空科技研究院
发明人：	熊江辉;陈颖
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910716807.8
公开号：	CN110412182A
代理机构：	北京汇知杰知识产权代理有限公司
代理人：	杨巍;柴春玲
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	518117 广东省深圳市龙岗区坪地高桥工业园工业三路龙口工业园2#、5#厂房及宿舍
主权项：	1.一种检测尿液中皮质醇的方法，其特征在于，以同位素内标为校准品，以尿液中的肌酐含量来均一化不同个体的尿液浓度的差异，结合UPLC-MS/MS技术检测尿液中皮质醇的浓度。 2.一种检测尿液中皮质醇的方法，所述方法包括：步骤1，配制样品： 1a.配制标品溶液，所述标品溶液为多个浓度的皮质醇标品溶液和多个浓度的肌酐标品溶液；优选地，多个浓度的皮质醇标品溶液的数目可以为至少3个，优选为4个至10个，更优选为4个、5个或6个；优选地，多个浓度的肌酐标品溶液的数目可以为至少3个，优选为4个至10个，更优选为4个、5个或6个； 1b.配制同位素内标溶液，其为皮质醇同位素内标溶液和肌酐同位素内标溶液；优选地，所述皮质醇同位素内标为皮质醇的氘代化合物，优选皮质醇-d4；优选地，所述肌酐同位素内标为肌酐的氘代化合物，优选肌酐-d3；优选地，所述同位素内标溶液的溶剂为甲醇、甲酸或其混合物的水溶液；步骤2，样品预处理，得到含同位素内标的标品溶液和含同位素内标的尿样，其中，所述样品预处理包括对尿液进行去除蛋白的步骤和向尿液和标品溶液中加入同位素内标溶液的步骤；优选地，所述去除蛋白的步骤包括对所述尿液先进行沉淀得到上清液，然后对所述上清液进行滤除；优选地，所述滤除包括先高速离心，再经0.22μm滤膜过滤所述上清液；步骤3，构建标准曲线，其中将步骤2的含同位素内标的标品溶液进行UPLC-MS/MS测定；步骤4，获得经肌酐浓度归一化的皮质醇浓度，其中，将步骤2的所述含同位素内标的尿样进行UPLC-MS/MS分析，结合步骤3得到的标准曲线获得皮质醇浓度和肌酐浓度；进而获得经肌酐浓度归一化的皮质醇浓度。 3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述尿液选自新鲜尿液、经长期低温冻存的尿液、或干尿液；所述新鲜尿液直接进行检测；经长期低温冻存的尿液地优选在低温冻存前在尿液加入叠氮化钠，优选加入叠氮化钠的量为尿液体积的0.05％至5％，优选为0.1％至2.5％，更优选为1％。 4.根据权利要求2所述的方法，其中，在步骤2中，所述沉淀包括在尿液中加入沉淀缓冲液，优选为1ml/L甲酸的乙腈溶液；或者，所述沉淀包括在低温如-15度至-30度，优选在-20度，沉淀约20分钟至数小时，优选为20分钟至1小时，更优选为30分钟。 5.一种检测尿液中皮质醇浓度的系统，所述系统包括：样品配制模块，所述模块用于配制标品溶液和同位素内标溶液，所述标品溶液为多个浓度的皮质醇标品溶液和多个浓度的肌酐标品溶液；优选地，多个浓度的皮质醇标品溶液的数目可以为至少3个，优选为4个至10个，更优选为4个、5个或6个；优选地，多个浓度的肌酐标品溶液的数目可以为至少3个，优选为4个至10个，更优选为4个、5个或6个；所述同位素内标溶液为皮质醇同位素内标溶液和肌酐同位素内标溶液；优选地，所述皮质醇同位素内标为皮质醇的氘代化合物，优选皮质醇-d4；优选地，所述肌酐同位素内标为肌酐的氘代化合物，优选肌酐-d3；优选地，所述同位素内标溶液的溶剂为甲醇、甲酸或其混合物的水溶液；样品预处理模块，对样品进行预处理，得到含同位素内标的标品溶液和含同位素内标的尿样，其中，所述样品预处理包括对尿液进行去除蛋白的步骤和向尿液和标品溶液中加入的相应的同位素内标溶液的步骤；优选地，所述去除蛋白的步骤包括对所述尿液先进行沉淀得到上清液，然后对所述上清液进行滤除；优选地，所述滤除包括先高速离心，再经0.22μm滤膜过滤所述上清液；数据测定模块，将所述含同位素内标的标品溶液进行UPLC-MS/MS测定；将所述含同位素内标的尿样进行UPLC-MS/MS测定；计算模块，用含同位素内标的标品溶液的UPLC-MS/MS结果构建标准曲线，结合含同位素内标的尿样的UPLC-MS/MS结果获得皮质醇浓度和肌酐浓度；进而获得经肌酐浓度归一化的皮质醇浓度。 6.根据权利要求5所述的系统，其中，所述尿液选自新鲜尿液、经长期低温冻存的尿液、或干尿液；经长期低温冻存的尿液地优选在低温冻存前在尿液加入叠氮化钠，优选加入叠氮化钠的量为尿液体积的0.05％至5％，优选为0.1％至2.5％，更优选为1％。 7.根据权利要求5所述的系统，其中，在所述样品预处理模块中，所述沉淀包括在尿液中加入沉淀缓冲液，优选为1ml/L甲酸的乙腈溶液；或者，所述沉淀包括在低温如-15度至-30度，优选在-20度，沉淀约20分钟至数小时，优选为20分钟至1小时，更优选为30分钟。 8.根据权利要求5所述的系统，其中，在所述样品预处理模块中得到的含同位素内标的标品溶液在进行UPLC-MS/MS测定之前还进行稀释；或者，在所述样品预处理模块中得到的含同位素内标的尿样在进行UPLC-MS/MS测定之前还进行稀释。 9.一种检测皮质醇浓度和肌酐浓度的试剂用于评估人体压力状况的试剂盒的用途，优选地，所述试剂包括皮质醇标品、肌酐标品、皮质醇同位素内标和肌酐同位素内标。 10.一种检测皮质醇浓度和肌酐浓度的试剂用于检测与皮质醇相关的疾病的试剂盒的用途，优选地，所述试剂包括皮质醇标品、肌酐标品、皮质醇同位素内标和肌酐同位素内标。
所属类别：	发明专利