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一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法
| 专利名称： | 一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法，在血浆样品中加入纳米二氧化硅，充分混匀，室温静置20~50min后离心，得到固体沉淀物；将固体沉淀物用氯化钠溶液洗涤，离心，得到沉淀物用洗脱液重悬，离心，得上清；色谱检测条件为：色谱柱：C18色谱柱，流动相：甲醇‑乙腈‑水溶液，色谱柱柱温为35~45℃，检测波长为220nm，流速为1~3mL/min；取载脂蛋白A标准品，配置成不同浓度，测定绘制标准曲线；将样品测定，根据标准曲线计算得到载脂蛋白的浓度。通过对血浆样品的简单处理，排除了血浆中其他复杂成分对检测结果的影响，处理后的样品可直接进样检测，检测灵敏度高，检测时间短，重复性好。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 缪荣明 |
| 发明人： | 缪荣明 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2018-04-26T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-05T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810384177.4 |
| 公开号： | CN110412194A |
| 代理机构： | 南京汇恒知识产权代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 王月霞 |
| 分类号： | G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 214043 江苏省无锡市北塘大街100号 |
| 主权项： | 1.一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1）在血浆样品中加入纳米二氧化硅，充分混匀，室温静置20~50min后离心，得到固体沉淀物； 2）将步骤1）的固体沉淀物用氯化钠溶液洗涤，离心，得到沉淀物用洗脱液重悬，离心，得上清； 3）色谱检测条件为：色谱柱：C18色谱柱，流动相：甲醇-乙腈-水溶液，色谱柱柱温为35~45℃，检测波长为220nm，流速为1~3mL/min； 4）标准曲线的制作：取载脂蛋白A标准品，配置成不同浓度，采用步骤3）的条件进行测定，绘制标准曲线； 5）将步骤2）的样品采用步骤3）的条件进行测定，根据标准曲线计算得到载脂蛋白的浓度。 2.根据权利要求1所述一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤1）中纳米二氧化硅加入量为1~5mg/mL血浆样品。 3.根据权利要求1所述一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤2）中所述氯化钠溶液浓度为0.5~1.5mol/L。 4.根据权利要求1所述一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤2）中所述洗脱液为含10~15%（wt）乙醇的Tris-HCl洗脱液或者磷酸盐缓冲液。 5.根据权利要求1所述一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤3）中所述流动相中甲醇、乙腈与水溶液的体积比为： 50 ：5：（30~60）。 6.根据权利要求1所述一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法，其特征在于，步骤3）中所述色谱柱为ZORBAX 80A Extend-C18 。 7.根据权利要求1所述一种液相色谱检测载脂蛋白浓度的方法，，其特征在于，步骤4）中取载脂蛋白A标准品配置成浓度分别为0µg/mL、20µg/mL 、40µg/mL 、80µg/mL、120µg/mL、160µg/mL、200µg/mL、400µg/mL、600µg/mL,采用步骤3)的条件进行测定，以峰面积Y对浓度X进行线性回归，绘制标准曲线。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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