原文传递
一种液相色谱检测颗粒酶A的方法
| 专利名称： | 一种液相色谱检测颗粒酶A的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种液相色谱检测颗粒酶A的方法，将血清标本先经低温加热低速离心，再沸水加热后高速离心，取上清液，与洗脱液充分混合，得到供试品；取颗粒酶A标准品，用流动相溶解配置成溶液；精密量取对照品溶液及供试品溶液各10~20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算血清中颗粒酶A的含量；其中，色谱条件为：色谱柱以阳离子交换树脂为填充剂；以pH值为2～4的水为流动相；流动相的流速为0.8～1.2ml/min；检测波长为200～220nm；柱温为20～50℃。本发明首次采用液相色谱检测颗粒酶A的浓度，检测灵敏度高，检测时间短，重复性好，方法简便、准确、重复性好、专属性强。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 缪荣明 |
| 发明人： | 缪荣明 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2018-04-26T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-05T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810383906.4 |
| 公开号： | CN110412179A |
| 代理机构： | 南京汇恒知识产权代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 王月霞 |
| 分类号： | G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 214043 江苏省无锡市北塘大街100号 |
| 主权项： | 1.一种液相色谱检测颗粒酶A的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1）供试品的制备：将血清标本先经低温加热低速离心，再沸水加热后高速离心，取上清液，与洗脱液充分混合，得到供试品； 2）对照品的制备：取颗粒酶A标准品，用流动相溶解配置成溶液； 3）测定：精密量取对照品溶液及供试品溶液各10~20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算血清中颗粒酶A的含量； 其中，色谱条件为：色谱柱以阳离子交换树脂为填充剂；以pH 值为2～4 的水为流动相；流动相的流速为0.8 ～ 1.2ml/min ；检测波长为200 ～ 220nm ；柱温为20～50℃。 2.根据权利要求1所述一种液相色谱检测颗粒酶A的方法，其特征在于，步骤1）中所述低温加热温度为40~65℃，加热时间为20~50min。 3.根据权利要求1所述一种液相色谱检测颗粒酶A的方法，其特征在于，步骤1）中所述沸水加热时间为10~20min。 4.根据权利要求1所述一种液相色谱检测颗粒酶A的方法，其特征在于，步骤1）中所述低速离心转速为4000rpm，所述高速离心转速为8000rpm，离心时间为5~10min。 5.根据权利要求1所述一种液相色谱检测颗粒酶A的方法，其特征在于，所述洗脱液由0.05 M硫酸钠、0.01M 磷酸钠、0.1%十二烷基磺酸钠组成，pH在6.5~7.2之间。 6.根据权利要求1所述一种液相色谱检测颗粒酶A的方法，其特征在于，所述阳离子交换树脂色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18 液相色谱柱。 7.根据权利要求1所述一种液相色谱检测颗粒酶A的方法，其特征在于，所述外标法以峰面积计算公式为供试品标示含量（%）=（供试品溶液峰面积/ 标准品溶液峰面积）×100%。 8.根据权利要求1所述一种液相色谱检测颗粒酶A的方法，其特征在于，所述流动相用1mol/L 的硫酸溶液调节pH 值。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
检索历史
应用推荐
