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一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法
| 专利名称： | 一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种液相色谱检测组织蛋白酶G浓度的方法，将血样于3000~5000r/min离心10~20min取血清，加入碘乙酰胺与NH4HCO3混和，避光45 min充分混匀，依次用氯化钠溶液、乙腈洗脱，收集洗脱液；取组织蛋白酶G标准品，用流动相溶解配置成溶液；精密量取对照品溶液及供试品溶液各10~20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算血清中组织蛋白酶G的含量。本发明首次采用液相色谱检测组织蛋白酶G的浓度，通过对血浆样品的简单处理，排除了血浆中其他复杂成分对检测结果的影响，处理后的样品可直接进样检测，检测灵敏度高，检测时间短，重复性好，方法简便、准确、重复性好、专属性强。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 缪荣明 |
| 发明人： | 缪荣明 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2018-04-26T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-05T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810383907.9 |
| 公开号： | CN110412138A |
| 代理机构： | 南京汇恒知识产权代理事务所(普通合伙) |
| 代理人： | 王月霞 |
| 分类号： | G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 214043 江苏省无锡市北塘大街100号 |
| 主权项： | 1.一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1）供试品的制备：将血样于3000~5000r/min离心10 ~20min取血清，加入碘乙酰胺与NH4HCO3混和，避光 45 min充分混匀，依次用氯化钠溶液、乙腈洗脱，收集洗脱液； 2）对照品的制备：取组织蛋白酶G标准品，用流动相溶解配置成溶液； 3）测定：精密量取对照品溶液及供试品溶液各10~20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算血清中组织蛋白酶G的含量； 其中，色谱条件为：色谱柱以阳离子交换树脂为填充剂；以乙腈和缓冲盐溶液的混合溶液为流动相；流动相的流速为0.8 ～ 1.2ml/min ；检测波长为190 ～ 210nm ；柱温为20～ 50℃。 2.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，步骤1）中碘乙酰胺与NH4HCO3的质量比为1： 10~20。 3.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，步骤1）中所述氯化钠溶液浓度为0.5~1.5mol/L。 4.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，步骤2）中所述流动相为乙腈和缓冲盐溶液的混合溶液，所述的乙腈和缓冲盐溶液的体积比例为75:25～85:15。 5.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，所述阳离子交换树脂色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18 液相色谱柱。 6.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，所述外标法以峰面积计算公式为供试品标示含量（%）=（供试品溶液峰面积/ 标准品溶液峰面积）×100%。 7.根据权利要求1所述一种液相色谱检测血清中组织蛋白酶G的方法，其特征在于，所述缓冲盐溶液由3 .728gKCl和7mlHCl溶解于1000ml水中制得。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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