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原文传递一种检测登革2型病毒抗体的重组抗原蛋白、试剂盒及其应用

专利名称：	一种检测登革2型病毒抗体的重组抗原蛋白、试剂盒及其应用
摘要：	本发明公开了一种检测登革2型病毒抗体的重组抗原蛋白、试剂盒及其应用。重组抗原蛋白的制备包括：筛选检测靶标编码基因，然后将编码基因连接到原核表达载体中，构建得到重组表达载体；转化入宿主细胞中，诱导表达，得到重组抗原蛋白DENV‑Ag2。所述重组抗原蛋白为登革2型病毒特异性抗原，经原核表达、纯化而成。本发明的重组抗原蛋白具有特异性强、亲和力高的优点，与登革2型病毒抗体具有很高亲和力，而与其它型别登革病毒及相近虫媒病毒无血清学交叉反应。本发明提供的试剂盒具有操作简单方便、灵敏度高、特异性强等优点，能够快速、准确地鉴别诊断登革2型病毒抗体，从而诊断登革病毒的感染情况，为之后的治疗提供有利依托。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	中国人民解放军南部战区疾病预防控制中心
发明人：	任瑞文;李硕;李春缘;陈月;李以圣;陈迪佳;刘军
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910320435.7
公开号：	CN110426517A
代理机构：	广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：	江裕强
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510507 广东省广州市天河区东莞庄路91号
主权项：	1.一种检测登革2型病毒抗体的重组抗原蛋白DENV-Ag2，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。 2.一种权利要求1所述检测登革2型病毒抗体的重组抗原蛋白DENV-Ag2的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。 3.一种重组表达载体，其特征在于，插入了权利要求2中所述SEQ ID NO.1所述核苷酸序列。 4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，包括原核表达载体；所述原核表达载体为pMAL c2x原核表达载体。 5.权利要求2所述能够检测登革2型病毒抗体的重组抗原蛋白DENV-Ag2的编码基因、权利要求3所述重组表达载体的应用。 6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：（1）筛选登革2型病毒特异性检测靶标的编码基因；（2）设计PCR扩增引物，并通过PCR扩增编码基因；（3）通过限制性酶切和连接，将编码基因片段连接到原核表达载体中，构建得到重组表达载体；（4）将所述重组表达载体转化至表达宿主细胞中，培养所述表达宿主细胞使其产生重组抗原蛋白，并通过纯化得到所述检测登革2型病毒抗体的重组抗原蛋白DENV-Ag2。 7.权利要求1所述检测登革2型病毒抗体的重组抗原蛋白DENV-Ag2在诊断登革病毒感染中的应用。 8.一种诊断登革病毒感染的ELISA试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述检测登革2型病毒抗体的重组抗原蛋白DENV-Ag2。 9.根据权利要求8所述的ELISA试剂盒，其特征在于，包括抗体检测板、ELISA反应液、封板胶纸、说明书及自封袋；所述ELISA反应液包括酶结合物工作液、DENV阳性对照液、DENV阴性对照液、浓缩洗涤液、样品稀释液、显色剂A、显色剂B及终止液；其中，DENV阳性对照液为登革2型病毒抗体标准品，DENV阴性对照液为登革2型病毒抗体阴性血清，所述酶结合物工作液为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG溶液；所述样品稀释液包含浓度为10mmol/L的磷酸盐缓冲液、质量百分比浓度为1％的BSA、体积百分比浓度为0.05％的Tween-20和浓度为1mg/L庆大霉素；所述浓缩洗涤液包含浓度为0.2mol/L的磷酸盐缓冲液及体积百分比浓度为1%的Tween-20；所述显色液A包括质量百分比浓度为0.02%的H2O2溶液；显色液B包括质量百分比浓度为0.4‰的TMB-HCl溶液；终止液为浓度2M的 H2SO4溶液。 10.根据权利要求9所述的ELISA试剂盒，其特征在于，所述抗体检测板的制备，包括如下步骤：将所述重组抗原蛋白DENV-Ag2纯化，然后以梯级浓度包被在酶联板上，每孔50-100μl，4-8℃包被16-18小时，而后用磷酸盐吐温缓冲液洗涤1-2分钟；将其拍干后，用质量百分比浓度为4-8%牛血清白蛋白溶液于37℃封闭4-8小时，晾干后即得到所述抗体检测板。
所属类别：	发明专利