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原文传递一种使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法

专利名称：	一种使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法
摘要：	本发明提供一种使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法，包括如下步骤:S1.宫颈细胞样本采集；S2.在离心管中加入样本密度分离液，然后吸取细胞样本转移至离心管中；S3.进行两次离心，第一次离心在200g离心力作用下离心2min，然后将上层液体吸走；剩余液体第二次离心在800g离心力作用下离心5min，最后缓慢倒掉上清液；S4.观察离心管底部的细胞沉淀量，根据沉淀量的多少添加缓冲液；最后制成细胞悬液。本发明创新性地使用密度梯度分层离心法进行抗原修复，在不需要高温高压的条件下，也能达到与热修复法同样的抗原修复效果。避免了抗原修复要采用热修复而使用到的具有安全风险的加热仪器设备，且使得整个实验过程比较高效快捷。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州江元医疗科技有限公司
发明人：	苏仲春
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910859753.0
公开号：	CN110488001A
代理机构：	广州圣理华知识产权代理有限公司
代理人：	胡小英
分类号：	G01N33/531(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510670 广东省广州市黄埔区科学城科丰路31号华南新材料创新园G7栋6楼
主权项：	1.一种使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法，其特征在于，包括如下步骤: S1.宫颈细胞样本采集获得细胞样本； S2.在离心管中加入样本密度分离液，然后吸取细胞样本沿离心管壁缓慢转移至离心管中；所述样本密度分离液是丙三醇与乙醇的混合溶液，丙三醇与乙醇的体积比为1:2～2:1； S3.进行两次离心，第一次离心在150～200g低速离心力作用下离心1min～5min，然后将上层液体吸走；剩余液体第二次离心在800g～1000g离心力作用下离心1min～10min，最后缓慢倒掉上清液； S4.观察离心管底部的细胞沉淀量，根据沉淀量的多少添加缓冲液；最后用漩涡混匀器将离心管底部的细胞打散，制成细胞悬液。 2.根据权利要求1所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法，其特征在于，S1所述宫颈细胞样本采集操作为：将宫颈标本采集刷刷头毛尖插入宫颈口，轻轻用力使刷头上的刷毛紧贴子宫颈口，用手捏住刷杆尾部，顺时针方向旋转五圈；取出采集刷，卸下刷头放入细胞保存液瓶中，封盖。 3.根据权利要求1或2所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法，其特征在于，S2所述样本密度分离液与细胞样本的体积比为3:7～7:3。 4.根据权利要求3所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法，其特征在于，S2所述样本密度分离液与细胞样本的体积比为4:6。 5.根据权利要求1或2所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法，其特征在于，S3所述第一次离心在200g离心力作用下离心2min。 6.根据权利要求1或2所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法，其特征在于，S3所述剩余液体第二次离心在800g离心力作用下离心5min。 7.根据权利要求1或2所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法，其特征在于，S4所述细胞沉淀量与缓冲液的体积比为1:1。 8.权利要求1-7任一所述使用密度梯度分层离心法进行抗原修复的方法最终获得的细胞悬液。 9.一种免疫细胞染色方法，其特征在于，包括如下步骤： S1.将权利要求8所述的细胞悬液滴加到制片仓的载玻片上静止沉降10min，完成制片； S2.将上述载玻片用磷酸缓冲液冲洗，然后滴加内源性过氧化物酶阻断剂，室温下孵育；再用磷酸缓冲液冲洗，之后滴加封闭液，室温下孵育； S3.继续滴加稀释后的一抗溶液，32℃恒温水浴30-60min；然后用磷酸缓冲液冲洗，再滴加二抗溶液，32℃恒温水浴10-20min；再用磷酸缓冲液冲洗；最后滴加DAB显色液。 10.根据权利要求9所述的免疫细胞染色方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液冲洗为用磷酸缓冲液冲洗3次，每次1-2分钟；所述室温下孵育时间为10-20min。
所属类别：	发明专利