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原文传递双抗原夹心法检测免疫球蛋白M的试剂盒及其检测方法

专利名称：	双抗原夹心法检测免疫球蛋白M的试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明涉及一种双抗原夹心法检测免疫球蛋白M的试剂盒及其检测方法。利用IgM五聚体结构，一个IgM分子可与多个抗原结合，采用双抗原夹心空间邻近发光分析技术检测；试剂盒包括：酶标记物、发光标记物、辅助剂、触发剂和校准品；酶标记物包括过氧化物酶标记的抗原；发光标记物包括9,10‑二氢吖啶标记的抗原和Tris缓冲液；辅助剂包括发光辅助剂和枸橼酸盐缓冲液。本发明双抗原夹心法检测MP‑IgM的均相化学发光技术，采用双抗原夹心空间邻近发光分析检测技术，无需载体，没有包被、洗涤过程，试剂盒组分少，大大提高了MP‑IgM的检测灵敏度和特异性，使得检测结果更真实可信；同时优化了反应时间和反应步骤，使操作更简单。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	无锡壹闪生物科技有限公司
发明人：	奚伟红
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201811622243.3
公开号：	CN109738642A
代理机构：	北京酷爱智慧知识产权代理有限公司
代理人：	张绍磊
分类号：	G01N33/58(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	214174 江苏省无锡市惠山经济开发区惠山大道1699号50305室
主权项：	1.一种IgM的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒利用IgM五聚体结构，一个IgM分子与多个抗原结合，并采用双抗原夹心空间邻近发光分析技术检测；优选地，所述试剂盒采用双抗原夹心法检测IgM水平，具体包括：酶标记物、发光标记物、辅助剂、触发剂和校准品；其中，所述酶标记物的原料组分包括过氧化物酶标记的抗原，所述发光标记物的原料组分包括9,10-二氢吖啶标记的抗原。 2.根据权利要求1所述的IgM的检测试剂盒，其特征在于：所述酶标记物的原料组分还包括0.05M磷酸盐缓冲液；优选地，制备方法包括：称取5mg HRP溶解于1mL蒸馏水中，之后加入0.2mL新配的0.1M过碘酸钠溶液，室温下避光搅拌20min，将上述溶液装入透析袋中，对1mM pH 4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；加入20μL 0.2M pH 9.5碳酸盐缓冲液，然后立即加入0.1～1.0mg抗原室温避光轻轻搅拌2h，加新配的4mg/mL硼氢化钠液，混匀，于4℃放置2h，将上述液装入透析袋中，对0.15MpH 7.4PBS透析，4℃过夜；取出透析物，加适量甘油后置于-20℃冰箱保存。 3.根据权利要求1所述的IgM的检测试剂盒，其特征在于：所述发光标记物的原料组分还包括0.05M Tris缓冲液；优选地，制备方法包括：将发光底物Acridan用500μL的DMF溶解；吸取溶解的Acridan 41.3μL，加入0.05M硼酸钠缓冲液708.7μL，再加入50～250μg抗原，翻转混匀4～5次，室温静置30min；将标记反应管置于摇床上，于2～8℃下混合过夜，取出加入适量甘油后置于-20℃冰箱保存。 4.根据权利要求1所述的IgM的检测试剂盒，其特征在于：所述辅助剂的组分包括发光辅助剂和pH 6.0的枸橼酸盐缓冲液；优选地，制备方法包括：称取枸橼酸1.82g，枸橼酸钠10.45g，加纯水溶解并定容至1000mL，在枸橼酸盐缓冲液中加入发光辅助剂，混匀后分装，置于4℃冰箱保存备用；其中，更优选每瓶装10mL。 5.根据权利要求1所述的IgM的检测试剂盒，其特征在于：所述触发剂选用0.05M pH 8.0Tris-HCl缓冲液；优选地，制备方法包括：称取Tris 6.06g，氯化钠9g，加适量纯水溶解，再加入浓HCl 2.1mL混匀；之后加入吐温-20 2mL，混匀后定容至1000mL，分装，置于4℃冰箱保存备用；其中，更优选每瓶装200mL。 6.根据权利要求1～5任一项所述的IgM的检测试剂盒，其特征在于：所述抗原选用肺炎支原体抗原。 7.根据权利要求6所述的IgM的检测试剂盒，其特征在于：所述校准品包括MP-IgM校准品和0.1M校准品稀释液；优选地，制备方法包括：配制校准品稀释液：称取磷酸二氢钾14.1g，NaH2PO4·2H2O 3.0g，加超纯水溶解，Proclin-300 0.5～1mL，混匀后，加超纯水定容至1000mL，得到校准品稀释液，2～8℃储存备用；配制校准品：采用所述校准品稀释液将纯化MP-IgM稀释至目标浓度，2～8℃储存备用。 8.权利要求1～7任一项所述的试剂盒在双抗原夹心法检测肺炎支原体IgM中的应用。 9.权利要求1～7任一项所述的试剂盒在双抗原夹心法检测肺炎支原体IgM时的方法，包括步骤： S1：分别于反应管中加入25μL标准品/样本、25μL过氧化物酶标记的MP抗原和25μL发光标记物，震荡混匀； S2：于37℃恒温孵育15min； S3：分别加入5μL辅助剂至反应管，震荡混匀，静置1～2min；之后分别加入触发剂75μL，震荡混匀，立即检测，读取信号值； S4：根据校准品和样本发光值计算临界值指数COI；其中，COI≥1即为阳性，COI<1即为阴性。
所属类别：	发明专利