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原文传递双抗原夹心检测抗体的方法及试剂盒

专利名称：	双抗原夹心检测抗体的方法及试剂盒
摘要：	本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种双抗原夹心检测抗体的方法及试剂盒。所述方法在现有“一步两步结合法”双抗原夹心的基础上进行了改进，通过形成标记物‑抗标记物复合物以放大信号，本方法能够同时改善hook问题以及低浓度样本漏检问题。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东菲鹏生物有限公司
发明人：	周峻;黄记有;潘少丽;程珍珠;池朗山
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910772077.3
公开号：	CN110456073A
代理机构：	北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	王焕
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	523000广东省东莞市松山湖高新技术产业开发区花莲路5号1号厂房7楼
主权项：	1.一种双抗原夹心检测抗体的方法，所述方法以形成第一抗原Ag1-待检测抗体-第二抗原Ag2的形式完成检测，其中Ag1偶联有固相支持物，且所述第二抗原Ag2包含两种形式，所述方法包括以下步骤： a)将Ag1、第一形式Ag2与待检物在足以发生抗体/抗原结合反应的条件下接触，形成免疫复合物；其中以摩尔数计，Ag1的含量多于第一形式Ag2，且所述第一形式Ag2为偶联有标记物的Ag2； b)洗去未结合的待检测抗体； c)加入第二形式Ag2并使其与所述免疫复合物中剩余的抗原结合位点结合；所述第二形式Ag2为偶联有信号指示物的Ag2； d)加入偶联有信号指示物的抗标记物，所述抗标记物能够与所述标记物形成特异的标记物-抗标记物复合物并进行信号放大；步骤c)与d)无先后顺序； e)检测所述标记剂，以指示所述待检测抗体的存在和/或含量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标记物-抗标记物复合物中标记物/抗标记物的组合选自生物素或其衍生物/链霉亲和素(streptavidin)，生物素或其衍生物/亲和素(avidin)，生物素或其衍生物/中性抗生物素蛋白(NeutrAvidin)，生物素或其衍生物/抗生物素或其衍生物抗体，半抗原/抗体，抗原/抗体，肽/抗体，受体/配体，地高辛/地高辛配基，碳水化合物/凝集素和多核苷酸/互补的多核苷酸；其中生物素的衍生物为D-生物素、活化生物素、生物胞素、乙二胺生物素、尸胺生物素或脱硫生物素中的任一种。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二形式Ag2中，标记剂偶联到Ag2是通过桥接物间接实现的。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述桥接物选自蛋白、蛋白复合物或双功能交联剂中的一种或多种；可选的，所述桥接物选自标记物-抗标记物复合物，所述标记物-抗标记物复合物为权利要求1或2中所定义。 5.根据权利要求4所述的方法，所述蛋白或蛋白复合物中含有牛血清白蛋白、卵白蛋白、钥孔血蓝蛋白、免疫球蛋白、甲状腺球蛋白以及多聚赖氨酸中的至少一种。 6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述双功能交联剂选自： 1)MPBH、MPEG2A、BMPH、EMCH、KMUH中的任一种； 2)或1)中物质的含马来酰亚胺基团和氨基或酰肼基团的衍生物中的任一种； 3)或由1)、2)中物质组成的组。 7.根据权利要求1～6任一项所述的双抗原夹心检测抗体的方法，其特征在于，所述固相支持物为磁珠、玻片、膜式基片或设置有加样孔的板材；可选的，所述磁珠为γFe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子，或它们与有机高分子材料的复合体。 8.根据权利要求1～6任一项所述的双抗原夹心检测抗体的方法，其特征在于，在步骤c)和d)中，所述信号指示物独立的选自发色团、地高辛标记探针、电子致密物质、胶体金或酶中的任一种或多种；可选的，所述信号指示物为吖啶酯。 9.试剂盒，其包括权利要求1～8任一项中所定义的抗标记物、第一抗原Ag1以及第二抗原Ag2；可选的，所述试剂盒还包括样品预处理液、缓冲液以及显色剂中的一种或多种。 10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗原Ag1以及第二抗原Ag2为能够与疾病病原体所产生的抗体结合的抗原；可选的，所述疾病病原体包括病毒、细菌、真菌或寄生虫中的一种或多种；可选的，所述病毒包括：腺病毒科(adenoviridae)、沙粒病毒科(arenaviridae)、星状病毒科(astroviridae)、本雅病毒科(bunyaviridae)、杯状病毒科(caliciviridae)、黄病毒科(flaviviridae)、肝炎病毒科(hepeviridae)、单分子负链RNA病毒目(mononegavirales)、网巢病毒目(nidovirales)、小RNA病毒科(picornaviridae)、正黏液病毒科(orthomyxoviridae)、乳头瘤病毒科(papillomaviridae)、细小病毒科(parvoviridae)、多瘤病毒科(polyomaviridae)、痘病毒科(poxviridae)、呼肠孤病毒科(reoviridae)、反转录病毒科(retroviridae)以及披膜病毒科(togaviridae)中的一种或多种；可选的，所述细菌包括：葡萄球菌属、链球菌属、李式杆菌属、丹毒丝菌属、肾杆菌属、芽孢杆菌属、梭菌属、分支杆菌属、放线菌属、奴卡菌属、棒状杆菌属、红球菌属中的一种或多种，和/或，炭疽杆菌、丹毒杆菌、破伤风杆菌、李氏杆菌、气肿疽杆菌结核杆菌、大肠杆菌外、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、布氏杆菌、产气夹膜杆菌、流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、卡他摩拉克氏菌、不动杆菌属、耶尔森菌属、嗜肺军团菌、百日咳杆菌、副百日咳杆菌、志贺菌属、巴斯德菌属、霍乱弧菌以及副溶血性杆菌中的一种或多种；可选的，所述真菌包括：粗球孢子菌、普赛德斯球抱子菌、荚膜组织胞浆菌、杜氏组织胞浆菌、洛博芽生菌、巴西副球孢子菌、皮炎芽生菌、申克氏孢子丝菌、马尔尼菲青霉菌、白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、葡萄牙假丝酵母、曲霉菌、甄氏外瓶霉、裴氏着色霉、紧密着色霉、疣状着色霉、皮炎着色霉、白地霉、波氏足肿菌、新型隐球菌、丝孢酵母菌、米根霉、印度毛霉、伞枝犁头霉、总状共头霉、蛙粪霉、冠状耳霉、异孢耳霉、西伯鼻孢子菌、透明丝孢霉以及暗色丝孢霉中的一种或多种；可选的，所述寄生虫包括：消化道内寄生虫、肝内寄生虫、肺内寄生虫、脑组织寄生虫、血管内寄生虫、淋巴管内寄生虫、肌肉组织寄生虫、细胞内寄生虫、骨组织寄生虫以及眼内寄生虫中的一种或多种。
所属类别：	发明专利