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原文传递一种Glypican-3双抗体夹心法检测试剂盒及检测方法

专利名称：	一种Glypican-3双抗体夹心法检测试剂盒及检测方法
摘要：	本发明涉及一种Glypican‑3双抗体夹心法检测试剂盒，其包括已包被捕捉抗体的包被微孔板以及偶联有标记酶的血清抗体；所述捕捉抗体为1H5、2D12或3A6；所述血清抗体包括：抗GPC3‑P1的血清抗体GPC3‑S1、抗GPC3‑P2的血清抗体GPC3‑S2、抗GPC3‑P3的血清抗体GPC3‑S3或抗GPC3‑P4的血清抗体GPC3‑S4，所述GPC3‑P1~GPC3‑P4的氨基酸序列如SEQ ID No.1~SEQ ID No.4所示；本发明还涉及利用上述检测试剂盒进行检测的方法。本发明具有检测方便、费用低且检测范围宽的优点。
专利类型：	发明专利
申请人：	河北省科学院生物研究所
发明人：	程华;武向丽;孙劲冲;吴萌
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T15:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T19:00:00+0805
申请号：	CN202010039984.X
公开号：	CN111175520A
代理机构：	石家庄新世纪专利商标事务所有限公司
代理人：	张晓龙
分类号：	G01N33/68;G01N33/535;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/535
申请人地址：	050081 河北省石家庄市友谊南大街46号
主权项：	1.一种Glypican-3双抗体夹心法检测试剂盒，其特征在于，其包括已包被捕捉抗体的包被微孔板以及偶联有标记酶的血清抗体；所述捕捉抗体为1H5、2D12或3A6；所述血清抗体包括：抗GPC3-P1的血清抗体GPC3-S1、抗GPC3-P2的血清抗体GPC3-S2、抗GPC3-P3的血清抗体GPC3-S3或抗GPC3-P4的血清抗体GPC3-S4；所述GPC3-P1的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述GPC3-P2的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述GPC3-P3的氨基酸序列如SEQ IDNo.3所示，所述GPC3-P4的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。 2.根据权利要求1所述的Glypican-3双抗体夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述捕捉抗体为1H5；所述血清抗体为GPC3-S4。 3.根据权利要求1或2所述的Glypican-3双抗体夹心法检测试剂盒，其特征在于，其还包括洗涤液、显色液、Glypican-3标准品以及终止液。 4.根据权利要求1或2所述的Glypican-3双抗体夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述标记酶为辣根过氧化物酶。 5.根据权利要求1所述的Glypican-3双抗体夹心法检测试剂盒，其特征在于，所述血清抗体通过如下方法制备：（1）将GPC3-P1、GPC3-P2、GPC3-P3和GPC3-P4分别与牛血清蛋白偶联得到多肽偶联物PC3-P1-BSA、GPC3-P2-BSA、GPC3-P3-BSA和GPC3-P4-BSA；（2）选取4只2公斤健康新西兰白兔，每个多肽偶联物免疫1只；免疫前每只兔子耳静脉取血清，作为阴性对照；GPC3-P1-BSA、GPC3-P2-BSA、GPC3-P3-BSA、GPC3-P4-BSA分别用生理盐水溶解稀释到浓度为1mg/ml；第一次免疫用弗氏完全佐剂，抗原的剂量为300ug/只，注射方式为背部皮内多点注射；（3）间隔2周后进行第二次免疫，佐剂为弗氏不完全佐剂；（4）共进行5次免疫，最后一次免疫2周后取血测定抗体效价，采集抗血清GPC3-S1、GPC3-S2、GPC3-S3和GPC3-S4。 6.一种利用权利要求1~5任一项所述Glypican-3双抗体夹心法检测试剂盒检测Glypican-3的方法，其特征在于，其包括如下步骤：（A）包被微孔板上以5ug/mL浓度包被捕获抗体，封闭，每孔加200uL 10%小牛血清作为封闭液，37℃1h；洗涤，恢复至室温，倾去封闭液，洗涤三次，每次震荡lmin，拍干；（B）加入待测溶液，37℃ 1h；洗涤，恢复至室温，洗涤三次，每次震荡lmin，拍干；（C）每孔加入100uL的血清抗体，37℃1h；洗涤，恢复至室温，洗涤三次，每次震荡lmin，拍干；（D）每孔加入100uL的羊抗兔的二抗-HRP，37℃放置30min；洗涤，洗涤3次，每次震荡1min，拍干；（D）每孔加底物显色液 100uL，37℃保温避光反应15min；（E）每孔加入50uL 终止液，终止反应；（F）用检测波长为450nm的酶标仪读取各孔光密度值。
所属类别：	发明专利