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检测Tau蛋白聚集调节化合物的方法
| 专利名称： | 检测Tau蛋白聚集调节化合物的方法 |
| 摘要： | 本发明提供了一种用于体外形成和/或检测Tau蛋白的成对螺旋丝(PHF)的方法，其包括在促进PHF形成的条件下将包含Tau蛋白制剂和聚阴离子辅因子的混合物孵育一段预定的时间。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 荷兰;NL |
| 申请人： | 扬森疫苗与预防公司 |
| 发明人： | R·克雷斯波罗德里格斯;C·A·阿佩特里 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2018-03-27T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-12T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201880018726.4 |
| 公开号： | CN110446925A |
| 代理机构： | 永新专利商标代理有限公司 |
| 代理人： | 王健 |
| 分类号： | G01N33/50(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 荷兰莱顿 |
| 主权项： | 1.一种用于体外形成Tau蛋白的成对螺旋丝(PHF)的方法，该方法包括在促进PHF形成的条件下将包含Tau蛋白制剂和聚阴离子辅因子的混合物孵育一段预定的时间。 2.根据权利要求1所述的方法，其中这些促进PHF形成的条件包括以350-500cpm，优选400-450cpm，特别是以425cpm摇动孵育混合物。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其中该Tau蛋白是全长重组Tau蛋白，优选含有两个N-末端插入物和四个微管结合结构域的最长同种型。 4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其中该Tau蛋白制剂是基本上纯的Tau制剂。 5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中该孵育混合物中Tau蛋白的浓度范围在10-30μM之间，优选在12-20μM之间。 6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该Tau蛋白处于还原形式。 7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该孵育在pH 6.0与7.4之间，优选在pH6.5与7.0之间，更优选在pH 6.7下进行。 8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该孵育在36℃与38℃之间的温度下进行，优选在37℃的温度下进行。 9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该聚阴离子辅因子是肝素。 10.一种用于检测Tau蛋白的成对螺旋丝(PHF)形成的体外方法，该方法包括以下步骤： (a)使用根据权利要求1-9中任一项的方法诱导PHF的形成；并且 (b)通过显微镜或光谱手段检测所形成的PHF。 11.根据权利要求10所述的方法，其中该光谱手段包括荧光光谱，优选硫黄素T荧光测定。 12.一种用于鉴定能够抑制或促进Tau蛋白的成对螺旋丝形成的化合物的体外方法，该方法包括以下步骤： (a)在不存在和存在测试化合物的情况下进行根据权利要求10或11所述的方法；并且 (b)对不存在所述测试化合物的情况下PHF形成的动力学与存在所述测试化合物的情况下PHF形成的动力学进行比较。 13.根据权利要求12所述的方法，其中该化合物是抗体或其片段。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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