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原文传递构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的方法

专利名称：	构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的方法
摘要：	本发明属于医学技术领域，公开了一种构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的方法，应用电极表面修饰技术，将抗体修饰到电极表面，适配体通过共价结合组装在金纳米颗粒上，利用抗体与tau蛋白的特异性结合作用将tau蛋白结合到电极表面，并在适配体的作用下增强其特异性吸附，构建出适配体‑抗体夹心模式的电化学生物传感器，用于检测阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量。本发明电化学生物传感器应用较为广泛，电化学生物传感器相较于传统的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法而言，具有制备简单、稳定性好、分析速度快、使用方便、成本低等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉科技大学
发明人：	郭振中;税冰清;陶丹
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910304378.3
公开号：	CN109975378A
代理机构：	北京金智普华知识产权代理有限公司
代理人：	杨采良
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	430081 湖北省武汉市青山区和平大道947号
主权项：	1.一种利用电化学生物传感器构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的方法，其特征在于，所述利用电化学生物传感器构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的方法应用电极表面修饰技术，将抗体修饰到电极表面；适配体通过共价结合组装在金纳米颗粒上；利用抗体与tau蛋白的特异性结合作用将tau蛋白结合到电极表面，并在适配体的作用下增强tau蛋白特异性吸附，构建出适配体-抗体夹心模式的电化学生物传感器用于检测阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量。 2.如权利要求1所述的利用电化学生物传感器构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的方法，其特征在于，所述利用电化学生物传感器构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的具体包括：步骤一，电极预处理：利用铝粉抛光，乙醇和纯水超声清洗电极表面各3分钟；将电极分别浸入2mol/L的氢氧化钾溶液、稀释20倍的浓硫酸和浓硝酸溶液中各15分钟；在0.5mol/L硫酸溶液中采用循环伏安法对电极进行活化，扫描范围0.4～1.7V，反复扫描获取稳定的循环伏安图；步骤二，金纳米颗粒的制备与表征：在烧杯中加入18mL纯水，再分别加入0.01mol/L四氯金酸溶液、0.01mol/L柠檬酸钠溶液和0.1mol/L硼氢化钠溶液各0.5mL；搅拌混合呈淡橙色，静置2小时，制备成金纳米颗粒胶体溶液；利用透射电子显微镜分析金纳米颗粒的形状、大小，通过表征确定制备的4nm金纳米颗粒是否成功；步骤三，固定抗体：将处理的金电极浸入250mmol/L的3-巯基丙酸乙醇溶液中24小时，再将电极在0.25mol/L EDC和0.05mol/L NHS的磷酸缓冲溶液中活化5小时；将5μL0.05mg/mL tau蛋白抗体滴加至金电极表面，于4℃下干燥12小时；加入1％牛血清白蛋白溶液封闭金电极表面；步骤四，制备适配体与金纳米颗粒的共轭体：将1mL0.03mol/L半胱胺加入10mL金纳米颗粒胶体溶液中，于50℃下超声处理1小时；再加入适配体于室温孵育4小时，制备成适配体与金纳米颗粒共轭体；步骤五，电化学技术检测：循环伏安法和差分脉冲伏安法测定tau蛋白含量在CHI660E电化学工作站完成。 3.如权利要求1所述的利用电化学生物传感器构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的方法，其特征在于，构建出适配体-抗体夹心模式的电化学生物传感器后还需进行样品采集，用EDTA抗凝管收集空腹静脉血4～5mL，2小时内进行离心处理取上清液得到血浆样本，待测，备用；血浆样本分装到冷冻管并储存于-80℃待测；在测定前，将所有样品在含有PBS缓冲溶液中以1:100体积比稀释；离心处理条件为：4℃，15min，3000rpm。 4.如权利要求1所述的利用电化学生物传感器构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的方法，其特征在于，构建出适配体-抗体夹心模式的电化学生物传感器后，以K3Fe(CN)6/K4Fe(CN)6作为氧化还原探针进行结果判定，在电解杯中加入K3Fe(CN)6/K4Fe(CN)6溶液与血液样本，利用差分脉冲伏安法检测样本。 5.一种利用权利要求1所述利用电化学生物传感器构建阿尔茨海默病血液中tau蛋白含量检测系统的方法构建的适配体-抗体夹心模式的电化学生物传感器。
所属类别：	发明专利