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原文传递用于对阿尔茨海默病的鉴别诊断的组合测试

专利名称：	用于对阿尔茨海默病的鉴别诊断的组合测试
摘要：	本发明提供了一种组合的免疫红外测定法，用于将阿尔茨海默病鉴别诊断和亚分类分为不同的疾病阶段。该方法可用于确保疾病诊断和患者分层。该测试考虑了体液中淀粉样‑β肽和Tau蛋白二级结构分布的变化的无标记检测。这种从天然到β‑片层富集的亚型的二级结构变化在临床疾病表现之前很多年就出现。现在，组合方法利用这种位移进行基于液体活组织检查的诊断。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	德国;DE
申请人：	波鸿鲁尔大学
发明人：	K.格沃特;A.纳伯斯;J.沙尔特纳
专利状态：	有效
申请日期：	2017-11-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201780082303.4
公开号：	CN110168374A
代理机构：	北京市柳沈律师事务所
代理人：	刘国军;邹宗亮
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	德国波鸿
主权项：	1.用于将阿尔茨海默病鉴别诊断和亚分类分为不同疾病阶段的方法，其通过直接分析体液中可溶性淀粉样-β(Aβ)肽级分和可溶性Tau蛋白级分的二级结构分布，包括以下步骤： (a)在包含第一红外传感器元件的第一IR池中传导至少一通量的具有可溶性Aβ肽的体液，所述第一红外传感器元件具有内部反射元件，所述内部反射元件具有红外透明材料的芯和至少一种直接接枝到所述芯的至少一个表面的Aβ肽的受体，所述Aβ肽的至少一种受体为能够特异性和构象独立地结合Aβ肽的抗体，并且通过短硅烷接头的硅烷化或通过短硫醇接头的硫醇化直接接枝到所述内部反射元件的至少一个表面上，使所述至少一种受体的可自由接近的胺基与短硅烷/硫醇接头上的胺反应性基团反应，并用不与Aβ肽交叉反应的阻断物质阻断短硅烷/硫醇接头上的剩余胺反应性基团，使IR光束通过所述第一IR池，并从其获得红外光谱； (b)在包含第二红外传感器元件的第二IR池中传导至少一通量的具有可溶性Tau蛋白的体液，所述第二红外传感器元件具有内部反射元件，所述内部反射元件具有红外透明材料的芯和至少一种直接接枝到所述芯的至少一个表面的Tau蛋白的受体，所述Tau蛋白的至少一种受体为能够特异性和构象独立地结合Tau蛋白的抗体，并且通过短硅烷接头的硅烷化或通过短硫醇接头的硫醇化直接接枝到所述内部反射元件的至少一个表面上，使所述至少一种受体的可自由接近的胺基与短硅烷/硫醇接头上的胺反应性基团反应，并用不与Tau蛋白交叉反应的阻断物质阻断短硅烷/硫醇接头上的剩余胺反应性基团；使IR光束通过所述第二IR池，并从其获得红外光谱；和 (c)分析获得的红外光谱以确定所述体液中可溶性Aβ肽和可溶性Tau蛋白的二级结构分布以用于鉴别诊断，其中Aβ肽和/或Tau蛋白的酰胺I带的向下位移指示疾病阶段。 2.权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二IR池的红外透明材料独立地选自硅、锗、硒化锌、硒化镓和金刚石，并且优选为锗。 3.权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二红外传感器元件包含锗内部反射元件，该锗内部反射元件具有梯形或平行四边形形状并且在红外线中是透明的，具有足够的信噪比以检测酰胺I带，且所述Aβ肽或所述Tau蛋白的至少一种受体分别是能够特异性和构象独立地结合Aβ肽或Tau蛋白的抗体，并且通过短硅烷接头的硅烷化或通过短硫醇接头的硫醇化直接接枝到所述内部锗反射元件的至少一个表面上，使所述至少一种受体的可自由接近的胺基与短硅烷/硫醇接头上的胺反应性基团反应，并用分别不与Aβ肽或Tau蛋白交叉反应的阻断物质阻断短硅烷/硫醇接头上的剩余胺反应性基团。 4.权利要求1或3所述的方法，其中所述内反射元件 (i)是锗单晶，优选为梯形切口锗单晶；和/或 (ii)允许或提供多于一路红外线通过反射元件；和/或 (iii)进一步适用于通过另一种光学方法进行的替代或平行分析，该另一种光学方法包括检测不同波长的荧光；和/或 (iv)不与所述Aβ肽或所述Tau蛋白交叉反应的阻断物质选自酪蛋白、乙醇胺、L-赖氨酸、聚乙二醇、白蛋白及其衍生物。 5.权利要求1、3或4所述的方法，其中所述硅烷和硫醇接头包括均质硅烷和硫醇接头、硅烷接头的混合物和硫醇接头的混合物，且具有不多于20个原子或不多于15个原子的有效接头链长，优选地，该硅烷接头具有下式之一： (i)X3Si-(CH2)n-Y-(CH2)n'-Z， (ii)X2R1Si-(CH2)n-Y-(CH2)n'-Z或 (iii)X(R1)2Si-(CH2)n-Y-(CH2)n'-Z，且该硫醇接头具有下式： (iv)WS-(CH2)n-Y-(CH2)n’-Z, 其中W为R1S-或H，X在每次出现独立地选自卤素和C1-6烷氧基，n为1至10的整数，n'为1至5的整数，R1在每次出现时独立地选自C1-6烷基，Y选自化学键、-O-、-CO-、-SO2-、-NR2-、-S-、-SS-、-NR2CO-、-CONR2-、-NR2SO2-和-SO2NR2-(其中R2为H或C1-6烷基)，且Z为胺-反应性基团，包括-CO2H、-SO3H及其酯衍生物。 6.权利要求5所述的方法，其中所述红外传感器元件可通过以下获得： (i)硅烷化，且在式(i)至(iii)的接头中，X独立地选自C1-6烷氧基，优选甲氧基和乙氧基，Y是-NHCO-，Z是-CO2H或其酯衍生物，且n为1至5的整数，n'为1至3的整数，优选n为3且n'为2；或者 (ii)硫醇化，且在式(iv)的接头中，W是H，Y是化学键，Z是-CO2H或其酯衍生物，且n是1至8的整数，n'是1至5的整数，优选n为8且n'为4。 7.根据权利要求1至6任一项所述的方法，其中 (i)与Aβ肽结合的受体是抗体，优选是与Aβ肽的中心表位特异性结合的抗体，包括抗体A8978；或 (ii)与Tau蛋白结合的受体是抗体，优选是特异性结合Tau的中间表位和结合存在于所有Tau变体中的表位的抗体，包括抗体Tau-5。 8.根据权利要求1至7任一项所述的方法，其中所述方法提供阿尔茨海默病的区分，将其区分为早期/前驱、中度和重度疾病阶段，并且其中 (i)所提及的生物标记物的酰胺I最大值均低于辨别阈值(1643cm-1±5cm-1)指示重度疾病阶段，其中所述生物标记物为来自CSF的Aβ、来自血浆的Aβ和来自CSF的Tau； (ii)两种生物标记物的酰胺I最大值低于辨别阈值(1643cm-1±5cm-1)指示中度疾病阶段，其中所述生物标记物的一种是来自CSF或血浆的Aβ，另一种是来自CSF的Tau， (iii)一种或两种生物标记物(来自CSF和/或血浆的Aβ)的酰胺I最大值低于辨别阈值(1643cm-1±5cm-1)指示早期疾病阶段，所述生物标记物不是来自CSF的Tau。 9.根据权利要求1至7任一项所述的方法，其中所述鉴别诊断提供痴呆类型的确定的临床特征，优选地，该方法包括检测来自CSF的Aβ(A)、来自血浆的Aβ(B)和来自CSF的Tau(C)的二级结构分布，最优选地，该方法能够鉴别诊断痴呆阿尔茨海默类型(DAT)和(疾病对照)，DAT患者被细分类为早期、中度和重度的DAT，并且DC患者被分成健康对照、其它疾病和由不是阿尔茨海默病的起源引起的痴呆。 10.如权利要求9所述的方法，其中， (i)对于两种生物标记物，Aβ的(A)和(B)以及Tau的(C)，辨别阈值(1643cm-1±5cm-1)将阿尔茨海默病和DC患者分开；和/或 (ii)(A)、(B)和(C)的组合提供适用于确定DAT诊断的生物标记物组。 11.权利要求1至10任一项所述的方法，其基于对体液的分析提供关于患者疾病状态的信息，其中所述生物标记蛋白的酰胺I带最大值的位移是指示疾病进展的分类物。 12.如权利要求11所述的方法，其中具有1638-1648cm-1值的阈值分类物是指示疾病进展的分类物。 13.一种用于将阿尔茨海默病鉴别诊断和亚分类成不同疾病阶段的试剂盒，其包含如权利要求1至7任一项所述的第一和第二红外传感器元件。 14.一种用于将阿尔茨海默病鉴别诊断和亚分类成不同疾病阶段的装置，所述装置包括如权利要求1至7任一项所定义的第一和第二红外传感器元件。 15.如权利要求1至7任一项所述的第一和第二红外传感器元件、权利要求13的试剂盒或权利要求14的装置用于直接分析体液中的可溶性淀粉样-β(Aβ)肽级分和可溶性Tau蛋白级分的二级结构分布的用途。
所属类别：	发明专利