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原文传递一种检测氨苄青霉素的生物传感器及其制备方法和应用

专利名称：	一种检测氨苄青霉素的生物传感器及其制备方法和应用
摘要：	本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于杂交连锁反应放大的荧光生物传感器。为了解决以上现有技术中检测氨苄青霉素的方法特异性和灵敏度都比较低、成本高的问题。一种基于核酸适配体检测氨苄青霉素的生物传感器，将切刻内切酶Nb.BbcCI与链杂交连锁反应的配合实现循环放大作用，以及硫黄素T与G‑四联体结合产生荧光，均相反应混合液。制备方法：制备金纳米粒子；将Walker与Track修饰到金纳米粒子表面；将标记的纳米金溶液与均相反应溶液混合；超支化杂交连锁反应、荧光检测；利用了核酸适配体的特异型识别，利用核酸适配体对目标物氨苄青霉素的高特异性检测；利用超支化杂交连锁反应放大，实现信号放大的作用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	刘素;瞿晓南;黄加栋;王玉;张儒峰;赵一菡;李莎莎
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910752467.4
公开号：	CN110441277A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	李桂存
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250022山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种检测氨苄青霉素的生物传感器，其特征在于，包括底物探针标记的金纳米粒子及均相反应液；所述的均相反应液包括：灭菌水、目标物、HAP1、HAP2、HAP3、HAP4、10×的缓冲液buffer、切刻内切酶Nb.BbcCI、ThT；所述的底物探针是由Walkker、Aptamer和Track形成，且Walkker和Track均含-SH；所述的Walker序列如SEQ No.1所示；所述的Aptamer序列如SEQ No.2所示；所述的Track序列如SEQ No.3所示；所述的HAP1序列如SEQ No.4所示；所述的HAP2序列如SEQ No.5所示；所述的HAP3序列如SEQ No.6所示；所述的HAP4序列如SEQ No.7所示。 2.一种权利要求1所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备金纳米颗粒溶液；（2）底物探针标记金纳米粒子；（3）将标记的纳米金溶液与均相反应溶液混合；（4）杂交连锁反应、荧光检测；所述步骤（3）的均相反应液包括：灭菌水、目标物、HAP1、HAP2、HAP3、HAP4、10×的缓冲液buffer、切刻内切酶Nb.BbcCI、ThT。 3.根据权利要求2所述的的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）的金纳米颗粒溶液的制备步骤如下：（1）取500μL 0.04g/ml HAuCl4加入200ml超纯水中，搅拌加热煮沸；（2）搅拌下，快速加入3ml 1%的柠檬酸三钠溶液，溶液颜色由浅黄色变为酒红色，继续加热15min后，慢慢冷却至室温，得到金纳米颗粒溶液，至于4℃保存备用；（3）使用紫外分光光度计，计算出金纳米颗粒溶液的浓度约为0.3nM。 4.根据权利要求2所述的的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）的底物探针标记金纳米粒子，操作步骤如下：（1）将Walker与Aptamer按照1：1的比例混合在一起，加入PBS缓冲液，室温下反应2 h；（2）将上述反应好的含-SH的Walkker和含-SH的Track按照1:20的比例混合，形成底物探针；（3）浓缩纳米金溶液至3 nM，移入1 mL玻璃瓶中，用锡箔纸封口；（4）按照纳米金与底物探针的浓度比1：5000混合均匀，4 ℃下放置24 h；（5）分多次缓慢加入50 μL PB缓冲液，搅拌10 min后，继续加入27 μL PBS缓冲液；4 ℃放置48 h；（6）洗脱未标记上的DNA链，既得底物探针标记金纳米粒子。 5.根据权利要求2所述的的制备方法，其特征在于，所述的步骤（4）杂交连锁反应温度为37℃，时间是2 h。 6.权利要求1所述的生物传感器在检测食品及水体中氨苄青霉素上的应用。 7.权利要求2所制备的生物传感器在检测食品及水体中氨苄青霉素上的应用。
所属类别：	发明专利