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原文传递一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法

专利名称：	一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法
摘要：	本发明一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，该方法主要是利用超声破壁法提取和智能双水相萃取法分离实现龙葵碱和龙葵多糖两种物质的同步提取和分离，包括制备龙葵碱混合标准品溶液和葡萄糖标准品储备液、超声破壁提取和双水相萃取法分离等步骤，该方法可以同时提取龙葵叶中的龙葵碱和龙葵多糖两种有效成分，并实现二者的分离和测定；该方法中的提取分离试剂可以回收利用；该方法通过高效液相对龙葵碱进行测定，通过紫外分光光度计对龙葵多糖进行测定，步骤简单、稳定且具有良好的再现性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	吉林师范大学
发明人：	逯洋;张桂杰;李闯;丛飚;于萍
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910900172.7
公开号：	CN110501200A
代理机构：	吉林省长春市新时代专利商标代理有限公司
代理人：	石岱
分类号：	G01N1/28(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	136000 吉林省四平市铁西区海丰大街1301号
主权项：	1.一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，其特征在于：该方法的具体步骤如下： (1)、制备龙葵碱混合标准品溶液和葡萄糖标准品储备液； (2)、超声破壁提取：首先称取龙葵叶10～100g，将其放入破碎机中充分打碎，将打碎后的龙葵叶放入烧杯中，按比例加入0.05g·mL-1的聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚溶液，将上述混合物放入超声破壁仪中，超声破壁30min；然后离心10min，取上清液，向残渣中按比例加入聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚的0.05g·mL-1的溶液，将混合物放入超声破壁仪中，超声破壁20min；然后离心10min，取上清液，合并上清液并过滤，得龙葵叶提取液，记为样品A； (3)双水相萃取法分离：取5mL～50mL样品A与柠檬酸钠溶液、聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚溶液和水按比例混合，充分振荡后，静置30min，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品A上和样品A下；将样品A上与水按比例混合，记为样品B，充分振荡后，放入80℃恒温水浴加热，静置1h，溶液再次分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品B上和样品B下；所述样品B上中富含龙葵碱；所述样品A下中的富含龙葵多糖；所述样品B下中为可进行循环利用的聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚。 2.一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，其特征在于： a、制备龙葵碱标准品溶液：准确称量澳洲茄碱和澳洲茄边碱的标准品25mg，分别放入5mL容量瓶中，用3mL乙醇溶解，并定容至5mL，得到浓度为5mg·mL-1的澳洲茄碱和澳洲茄边碱标准品储备液；然后，将两种单一对照品的存储溶液各取2ml，放入同一个10mL容量瓶中，定容至10mL，得到了龙葵碱混合标准品溶液； b、制备葡萄糖标准品溶液：准确称量10mg的葡萄糖，并放置于100mL容量瓶中，向其中加入20mL纯净水溶解，定容至100mL，获得浓度为0.1mg·mL-1的葡萄糖标准品储备液。 3.根据权利要求1所述的一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，其特征在于：步骤(2)中所述比例加入0.05g·mL-1的聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚溶液，比例为：每克龙葵叶加入7mL的聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚溶液；步骤(2)中所述向残渣中按比例加入聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚的0.05g·mL-1的溶液，具体比例为：每克龙葵叶加入3mL的聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚溶液。 4.根据权利要求1所述的一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，其特征在于：步骤(2)中所述柠檬酸钠溶液的浓度为0.25g·mL-1；所述聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚溶液的浓度为0.30g·mL-1；所述样品A与柠檬酸钠溶液和聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚溶液按比例混合，比例为：2：4.5：3.5；所述将样品A上与水按比例混合，比例为1：1。 5.根据权利要求1所述的一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，其特征在于：利用高效液相测定步骤(1)制得的龙葵碱混合标准品溶液的峰面积，龙葵碱的浓度与峰面积呈现良好的线性关系；检测样品A、样品A下、样品B上和样品B下中的龙葵碱，检测结果：样品B上中富含龙葵碱，样品A下和B下中没有检测出龙葵碱。 6.根据权利要求1所述的一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，其特征在于：使用苯酚-硫酸法，用紫外分光光度计检测样品A、样品A下、样品B上和样品B下中的龙葵多糖，操作步骤具体如下：精确吸取步骤(1)获得的葡萄糖标准品储备液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，之后将浓度为5％的苯酚分别向每个容量瓶中加入1mL，摇匀后迅速加入5mL浓度大于95％的浓硫酸，充分摇匀后，置于90℃水浴中显色25min，取出加水定容至10mL；根据紫外分光光度计测定标准溶液的吸光度进行标准曲线的绘制；精确吸取供试品1mL，置于10mL容量瓶中，之后将浓度为5％的苯酚向容量瓶中加入1mL，充分摇匀后迅速加入5mL浓度大于95％的浓硫酸，再次充分摇匀后，置于90℃水浴中显色25min，取出加水定容，利用紫外分光光度计测定供试品溶液的吸光度，根据标准曲线计算供试品溶液的吸光度；检测结果：样品A下中的富含龙葵多糖，样品B上和B下中的未检测出龙葵多糖；回收主要成分为聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚的B下进行循环利用。 7.根据权利要求1所述的一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，其特征在于：步骤(2)中所述龙葵碱指的是澳洲茄碱和澳洲茄边碱。 8.根据权利要求5所述的一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，其特征在于：所述高效液相质谱检测条件具体为：色谱柱：TC-C18(3.0mm×75mm)；流动相：0.2％甲酸-乙腈＝75％-25％；进样量：1uL；流速：0.2mL·min-1；柱温：30℃；气帘气(curtain gas)：35psi；离子化电压(ion-spray voltage)：+5.5kV；温度：550℃；喷雾气(nebulizing)：50psi；辅助加热气(heating gas)：50psi；去簇电压(declustering potential)：50V；入口电压(entrance potential)：10V；碰撞能(collision energy)：90eV；碰撞室出口电压(collision cell exit potential)：13V；澳洲茄碱检测离子对：(Q1 885.1->Q3 720.5)、(Q1 885.1->Q3396.5)、(Q1 885.1->Q3 157.3)，澳洲茄边碱检测离子对：(Q1 869.1->Q3704.6)、(Q1 869.1->Q3 396.5)、(Q1 869.1->Q3 157.3)；在此条件下，物质分离良好，澳洲茄碱和澳洲茄边碱的浓度与峰面积呈现良好的线性关系。 9.根据权利要求6所述的一种可循环使用的龙葵有效成份提取和分离方法，其特征在于：回收主要成分为聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚的B下进行循环利用，按比例补充纯的聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚，具体比例为：回收聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚B下：纯聚环氧乙烷聚环氧丙烷单丁基醚＝98：2。
所属类别：	发明专利