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原文传递一种基于蛋白质芯片技术鉴别羊毛纺织品文物样的方法

专利名称：	一种基于蛋白质芯片技术鉴别羊毛纺织品文物样的方法
摘要：	本发明涉及文物鉴定领域，公开了一种基于蛋白质芯片技术鉴别羊毛纺织品文物样的方法，本发明采用蚕沙为原料以简易绿色的方式制备碳点，将稀土铽离子直接掺杂进碳点，使得碳点具有高稳定性，然后将其标记山羊抗兔抗体作为蛋白质芯片的捕捉抗体，提取文物样的蛋白质作为抗原，兔抗羊毛角蛋白抗体作为固定抗体，根据产生的荧光信号，定性的检测出羊毛纺织品，该方法具有高通量，高特异性、高灵敏度等特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江理工大学
发明人：	王秉;李青青;尚亚廷;马维维;邓博之;万军民;彭志勤
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-10T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910618152.0
公开号：	CN110441526A
代理机构：	杭州永航联科专利代理有限公司
代理人：	侯兰玉
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	310018浙江省杭州市江干区下沙高教西区2号大街928号浙江理工大学
主权项：	1.一种基于蛋白质芯片技术鉴别羊毛纺织品文物样的方法，其特征在于包括以下步骤： 1)将0.01g-0.1g文物样溶解于100-1000mL的CB9.6缓冲液中，混合搅拌均匀，静置，取上清液即为抗原液； 2)取蚕沙，去除杂质，研磨成10μm-40μm的蚕沙粉末；将蚕沙粉末加去离子水后高温处理，取出冷却，将所得产物加入去离子水搅拌8-12min，然后超声处理，得到分散均匀的悬浊液，离心提取上清液；将上清液透析，微孔滤膜过滤，旋转蒸发浓缩后得到浓缩碳点溶液； 3)取8-12mL浓缩碳点溶液与4-6mL的0.1M Tb(NO3)3溶液在室温下反应2-4小时；然后再用分子量为500-1000Da的透析袋透析4天以上，移除自由的Tb3+，冷冻干燥后溶于去离子水中，得到铽修饰的碳点溶液； 4)取18-22μL铽修饰的碳点溶液，18-22μL EDC溶液和8-12μL NHS溶液混合反应3-7min；再加入0.15-0.25mg山羊抗兔抗体，常温下反应2-4h，反应结束后得到碳点标记的山羊抗兔抗体即为二抗液，置于1-5℃下保存保存； 5)将兔抗角蛋白抗体用蛋白质点样液制成0.4-0.6mg/mL的抗体固定液，用蛋白芯片点样仪的点样针在PSG上进行点样，点样结束后置于芯片固定盒中，在35-39℃下固定18-19h； 6)固定结束后，向所得基片的列阵加入30-40微升的0.8-1.2wt％BSA溶液，作为封闭液，在35-39℃下封闭1.5-2.5h； 7)弃去封闭液，用PBS7.4洗涤4-6次后甩干，取步骤1)所得的抗原液30-40微升，加入列阵，将CB9.6缓冲液作为阴性对照，在35-39℃的条件下孵育0.5-1.5h； 8)弃去抗原液，用PBS7.4洗涤4-6次后甩干，取30-40微升步骤4)所得二抗液加入列阵，在35-397℃下孵育0.5-1.5h； 9)弃去二抗液，用PBS7.4洗涤4-6次后甩干后，使用荧光扫描仪扫描检测荧光信号值，若文物样为羊毛纺织品，则能检测到荧光信号，反之则无。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，取蚕沙粉末，加入去离子水，置于反应釜或马弗炉或烘箱中，在190-210℃下反应2-4h。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中，所述铽修饰的碳点溶液浓度为0.3mg/mL，EDC溶液浓度为8-12mg/mL，NHS溶液浓度为1.3-1.7mg/mL。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤7)、8)和9)中，用PBS7.4洗涤为4-6min/次。
所属类别：	发明专利