详情

原文传递一种基于蛋白质芯片技术鉴别丝织品文物样的方法

专利名称：	一种基于蛋白质芯片技术鉴别丝织品文物样的方法
摘要：	本发明涉及文物鉴定领域，公开了一种基于蛋白质芯片技术鉴别丝织品文物样的方法，本发明采用水相法合成谷胱甘肽包覆的表面带有羧基的量子点标记山羊抗兔抗体作为蛋白质芯片的捕捉抗体，提取文物样的蛋白质作为抗原，兔抗丝素蛋白抗体作为固定抗体，根据产生的荧光信号，定性的检测出丝织品文物样，该方法具有高通量，高特异性、高灵敏度等性质。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江理工大学
发明人：	王秉;李青青;邓博之;马维维;尚亚廷;胡智文
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910602970.1
公开号：	CN110333341A
代理机构：	杭州永航联科专利代理有限公司
代理人：	侯兰玉
分类号：	G01N33/36(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	310018 浙江省杭州市江干区下沙高教西区2号大街928号浙江理工大学
主权项：	1.一种基于蛋白质芯片技术鉴别丝织品文物样的方法，其特征在于包括以下步骤： 1)将0.01g-0.1g的文物样溶解于100-1000mL的CB 9.6缓冲液中，混合搅拌均匀，静置，取上清液即为抗原液； 2)将CdCl2·2.5H2O溶于去离子水中，加入谷胱甘肽，二水合柠檬酸三钠，Na2TeO3和NaBH4，在搅拌作用下，用NaOH调节pH，间所得溶液转移至带回流的微波装置中，当溶液颜色呈淡绿色时开始回流2-3h，得到量子点； 3)将量子点加入无水乙醇中，在3500-4500rpm下离心3-7min，除去上清液，如此重复2-4次，将沉淀重悬于PBS7.4中； 4)取20-30μL步骤3)所得量子点母液，18-22μL EDC溶液和8-12μL NHS溶液混合反应3-7min；再加入0.15-0.25mg山羊抗兔抗体，常温下反应2-4h，反应结束后得到量子点标记的山羊抗兔抗体即为二抗液，置于1-5℃下保存备用； 5)将兔抗丝素蛋白抗体用蛋白质点样液制成0.4-0.6mg/mL的抗体固定液，用蛋白芯片点样仪的点样针在PSG上进行点样，点样结束后置于芯片固定盒中，在35-39℃下固定18-19h； 6)固定结束后，向所得基片的列阵中加入30-40微升的0.8-1.2wt％BSA溶液，作为封闭液，在35-39℃下封闭1.5-2.5h； 7)弃去封闭液，用PBS 7.4洗涤4-6次后甩干，取步骤1)所得抗原液30-40微升，加入列阵，将CB 9.6缓冲液作为阴性对照，在35-39℃的条件下孵育0.5-1.5h； 8)弃去抗原液，用PBS 7.4洗涤4-6次后甩干，取30-40微升步骤4)所得二抗液加入列阵，在35-39℃的条件下孵育0.5-1.5h； 9)弃去二抗液，用PBS 7.4洗涤4-6次后甩干后，使用荧光扫描仪扫描检测荧光信号值，若文物样为丝织物，则能检测到荧光信号，反之则无。 2.如权利要求1所述的一种基于蛋白质芯片技术鉴别丝织品文物样的方法，其特征在于，步骤2)中，所述量子点的制备方法具体为：将2.5×10-4mol的CdCl2·2.5H2O溶于25mL去离子水中，加入3.0×10-4mol谷胱甘肽，0.1g二水合柠檬酸三钠，0.5×10-4molNa2TeO3和2.5×10-4molNaBH4，在搅拌作用下，用NaOH调节pH至10-11，放入带回流的微波装置中，当溶液颜色便呈淡绿色时开始回流2-3h。 3.如权利要求1所述的一种基于蛋白质芯片技术鉴别丝织品文物样的方法，其特征在于，步骤4)中，所述量子点母液的浓度为0.8-1.2mg/mL，EDC溶液浓度为8-12mg/mL，NHS溶液浓度为1.3-1.7mg/mL。 4.如权利要求1所述的一种基于蛋白质芯片技术鉴别丝织品文物样的方法，其特征在于，步骤7)、8)和9)中，用PBS7.4洗涤为4-6min/次。
所属类别：	发明专利