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原文传递一种基于免疫层析技术的检测古代丝织品的方法

专利名称：	一种基于免疫层析技术的检测古代丝织品的方法
摘要：	本发明涉及文物检测领域，公开了一种基于免疫层析技术的检测古代丝织品的方法。本发明采用甲酸、硝酸钙溶液体系提取丝素蛋白，然后使用硒化镉/硫化锌量子点制备出一种高度发光的量子点珠。在使用免疫层析试纸检测时，量子点珠与丝素蛋白抗体结合，T线喷涂丝素蛋白，C线喷涂山羊抗兔抗体，待测丝织品文物样与量子点珠丝素蛋白抗体结合体在层析作用下移动，通过T、C线的荧光情况，即可判断文物样种属。本发明在对丝织品文物样检测时具有快捷、直观、准确、高灵敏度点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江理工大学
发明人：	王秉;李青青;欧阳毅;刘林帅;彭志勤;胡智文
专利状态：	有效
申请号：	CN201811047599.9
公开号：	CN109187960A
代理机构：	嘉兴永航专利代理事务所(普通合伙) 33265
代理人：	侯兰玉
分类号：	G01N33/558(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	310018 浙江省杭州市下沙高教园区2号大街浙江理工大学
主权项：	1.一种基于免疫层析技术的检测古代丝织品的方法，其特征在于，以mg、g和µl、ml计，步骤如下：A)称取18‑22mg硒化镉/硫化锌量子点，118‑122mg聚甲基丙烯酸甲酯，78‑82mg的聚马来酸酐‑十八烯共聚物，加入至1.8‑2.2ml的氯仿中，与4.5‑5.5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合，超声均化处理，再将氯仿蒸发；然后将所得水溶性量子点珠离心纯化，用去离子水清洗2‑4次；B)称取4‑6g桑蚕丝置于180‑220mL含0.018‑0.022M的碳酸钠溶液中，水浴55‑65min，水浴温度为80℃，取出用去离子水清洗三次以上，干燥；C)取1.8‑2.2g烘干的丝素，2.3‑2.7g硝酸钙，加入甲酸48‑52mL，搅拌80‑100min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性，透析冷冻干燥后，将得到的丝素蛋白研磨成粉，得到丝素蛋白粉；D)取0.9‑1.1µg的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺，0.1‑0.14mg的步骤A）中的水溶性量子点珠加入到2.5 ‑3.1mlPBS 7.4缓冲液中，然后边缓慢搅拌边逐滴加入90‑110µl 用稀释到1000倍的丝素蛋白抗体，在室温下放置35‑45min，离心，取沉淀物用600µl PBS 7.4缓冲液重悬，然后存放在1‑5℃环境下备用；E)取4‑6µl经步骤D）处理后的溶液喷涂在玻璃纤维素膜上，将其置于35‑40℃下干燥，将4.8mg/ml的丝素蛋白和稀释至3000倍的山羊抗兔抗体分别划在硝酸纤维素膜的检测线（T）和质控线（C）上，并置于35‑40℃下干燥；F)在PVC底板长1‑2 cm端下侧粘贴样品垫，在PVC底板下方距离0.8‑1.2cm处粘贴量子点珠结合垫，在PVC底板中间2.3‑2.7cm处粘贴硝酸纤维素膜，在PVC底板上方1.8‑2.2cm处粘贴吸水垫，将组装好的条板切成宽3.8‑4.2mm的条状，装于塑料卡中备用；G)在样品加入口处加入经处理的待测样品70‑80µl，在室温下放置10‑20min后，用光学读取器扫描试纸条带，若只有质控线出现荧光，说明所测样品含有桑蚕丝，同时在另一相同装置样品入口处加入70‑80µl的用CB 9.6缓冲液配制的100µg/ml的丝素蛋白经过相同处理后形成对照。
所属类别：	发明专利