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原文传递一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法

专利名称：	一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法
摘要：	本发明涉及文物检测领域，公开了一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，本发明先制备了硒化镉/硫化锌量子点珠，标记在修饰了铂的氧化石墨烯上，继而再吸附上丝素蛋白抗体形成探针，后与修饰在工作电极的文物样孵育一段时间下，可根据电化学扫描下得到的荧光信号判断文物样的种属，本发明在对古代丝织品检测时，具有样品用量少、直观、准确和灵敏度高的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江理工大学
发明人：	王秉;李青青;欧阳毅;刘林帅;彭志勤;胡智文
专利状态：	有效
申请号：	CN201811047606.5
公开号：	CN109187511A
代理机构：	嘉兴永航专利代理事务所(普通合伙) 33265
代理人：	侯兰玉
分类号：	G01N21/76(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	310018 浙江省杭州市下沙高教园区2号大街浙江理工大学
主权项：	1.一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，其特征在于，以µg、mg、g和µl、mL计，包括以下步骤：A)称取18‑22mg硒化镉/硫化锌量子点，118‑122mg聚甲基丙烯酸甲酯，78‑82mg聚马来酸酐‑十八烯共聚物，加入至1.8‑2.2ml的氯仿中，与4.5‑5.5ml浓度为的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合，用超声均化，再将氯仿蒸发，将所得水溶性量子点珠离心纯化，用去离子水清洗2‑4次；B)称取步骤A）所得水溶性量子点珠0.1‑0.14mg，加入18‑22µl的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐，N‑羟基琥珀酰亚胺，反应1.5‑2.5h；C)将氧化石墨烯溶液与六氯合铂酸钾溶液混合，在冰水浴中反应，然后在剧烈搅拌下，加入硼氢化钠反应后，离心，用去离子水洗涤，烘干，得到含铂氧化石墨烯；D)取0.3‑0.5mg步骤C）所得的含铂氧化石墨烯，加入0.3‑0.5ml二甲基甲酰胺，超声处理1‑3h，然后加入0.04‑0.06g丙二胺以及0.008‑0.012g二环己基碳二亚胺，超声15‑25min，在55‑65℃反应4‑8h，加入0.15‑0.25ml乙醇静置过夜，用去离子水清洗2‑4次，烘干；E)往步骤B）所得的溶液中加入8‑12µl 2mg/ml的步骤D）处理后的产物，反应1.5‑2.5h后，离心除去上清液，加入8‑12µl稀释至1000倍的桑蚕丝素蛋白抗体，在1‑5℃环境下孵育过夜，加入8‑12µl的1wt%牛血清蛋白孵育1‑3h后，将溶液离心浓缩至5µl；F)称取4‑6g桑蚕丝置于180‑220mL含0.018‑0.022M的碳酸钠溶液中，水浴55‑65min，水浴温度为75‑85℃，取出用去离子水清洗三次以上，干燥，得到丝素；G)取1.8‑2.2g烘干的丝素，2.3‑2.7g硝酸钙，加入甲酸48‑52mL，搅拌80‑100min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性，透析冷冻干燥后，将得到的丝素蛋白研磨成粉备用；H)取10µl浓度为2‑3g/ml的壳聚糖溶液滴在抛光好的玻碳电极1和2上，晾干后滴加10µl 1.8‑2.2µl的2%戊二酮，室温孵育1‑3h，在电极1上滴加20ul用CB9.6缓冲液稀释的100µg/ml丝素蛋白作为对照，在电极2上滴加20ul经处理后的文物样，在1‑5℃冰箱里包被过夜，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3‑5遍，电极1，2上滴加28‑32ul的1wt%牛血清蛋白，室温孵育1‑3h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3‑5遍；I)将步骤E）所得的5µl浓缩液分别滴加至经步骤H)中处理的电极1，2上，在室温下孵育0.5‑1.5h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3‑5遍，晾干；J)将步骤I）中处理的电极置于含有0.1M过硫酸钾和0.1M氯化钾的PBS 7.4缓冲液中进行电化学扫描，得到电化学发光信号；若两电极均有发光信号，则判定文物样中有桑蚕丝，若只有电极1有发光信号，则判定文物样中无桑蚕丝。
所属类别：	发明专利