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原文传递一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法

专利名称：	一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法
摘要：	本发明涉及文物检测领域，公布了一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法。本发明先制备了硒化镉/硫化锌量子点珠，标记在修饰了铂的氧化石墨烯上，继而再吸附上羊毛角蛋白抗体形成探针后分别与修饰在工作电极的文物样和羊毛角蛋白孵育一段时间后，可根据电化学扫描下得到的荧光信号判断文物样是否为羊毛织品。本发明具有直观、准确、灵敏性高的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江理工大学
发明人：	王秉;李青青;欧阳毅;刘林帅;彭志勤;胡智文
专利状态：	有效
申请号：	CN201811028767.X
公开号：	CN109187510A
代理机构：	嘉兴永航专利代理事务所(普通合伙) 33265
代理人：	侯兰玉
分类号：	G01N21/76(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	310018 浙江省杭州市下沙高教园区2号大街浙江理工大学
主权项：	1.一种基于电化学发光法检测古代毛织品的方法，其特征在于，以µg、mg、g和µl、mL计，包括以下步骤：A)称取8‑12mg硒化镉/硫化锌量子点，58‑62mg聚甲基丙烯酸甲酯，38‑42mg聚马来酸酐‑十八烯共聚物，加入至0.8‑1.2ml的氯仿中，与4.5‑5.5ml浓度为1‑2mg/ml的十二烷基苯磺酸钠水溶液混合，超声波均化处理，再将氯仿蒸发，将所得水溶性量子点珠离心纯化，用去离子水清洗2‑4次；B)称取步骤A）所得水溶性量子点珠0.2‑0.22mg，加入1.8‑2.2µg的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐，1.2‑1.4µg的N‑羟基琥珀酰亚胺，2.6‑2.8ml的PBS 7.4缓冲液，反应1.5‑2.5h；C)将氧化石墨烯溶液与六氯合铂酸钠溶液混合，在冰水浴中反应，然后在剧烈搅拌下，加入硼氢化钠反应后，离心，用去离子水洗涤，烘干；D)向浓度为0.08‑0.12wt%的步骤C)中所得产物的水溶液中加入浓度为0.03‑0.05wt%的氢氧化钠溶液，超声分散2‑4h，加入盐酸调节pH为6.8‑7.2，用去离子水离心洗涤，将所得产物用去离子水分散至浓度为0.08‑0.12wt%，加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐至浓度为0.3‑0.5wt%，滴入三乙烯四胺至浓度为0.4‑0.6%，超声分散3‑7min，室温下搅拌反应20‑30h，透析烘干；E)向步骤B）所得的混合溶液中加入8‑12µl的2mg/ml的步骤D）所得的产物，反应1.5‑2.5h后，离心除去上清液，加入8‑12µl稀释至1000倍的羊毛角蛋白抗体，在1‑5℃环境下孵育过夜，加入8‑12µl的1wt%牛血清蛋白孵育1‑3h后，将溶液离心浓缩至5µl；F)称取8‑12g羊毛添加至180‑200ml乙醇中，在35‑45℃下搅拌1‑3h后，用去离子水冲洗3‑5次烘干；G)取4‑6g烘干的羊毛以1：18‑20 的浴比添加至CB 9.6缓冲液中，加入1‑1.4g亚硫酸钠，在55‑65℃下反应25‑35min，用去离子水冲洗3‑5次烘干；H)取13‑17wt%的硫酸铜溶液加入到13‑17wt%的氢氧化钠溶液中，直至完全沉淀，使氢氧化钠稍过量，用去离子水清洗沉淀3‑5次并抽滤3次，得到氢氧化铜沉淀；I)取氢氧化铜沉淀13‑17g，加入18‑22ml去离子水，在16‑18℃下缓慢加入无水乙二胺，同时用玻璃棒搅拌，直至沉淀完全溶解，得到铜乙二胺溶液；J)将经步骤G）中处理后的羊毛放入45‑55ml铜离子浓度为1.4‑1.6mol/L的铜乙二胺溶液中，在50‑60℃下溶解1‑1.5h后冷却至室温过滤；K)将步骤J）中过滤所得溶液装入透析袋透析，冷冻干燥，对干燥后的样品进行研磨，得到羊毛角蛋白；L)取10µl浓度为2‑3g/ml的壳聚糖溶液滴在抛光好的玻碳电极1和2上，晾干后滴加10µl 1.8‑2.2µl的2%戊二酮溶液，室温孵育1‑3h，在电极1上滴加20ul用CB9.6缓冲液稀释的100µg/ml羊毛角蛋白作为对照，在电极2上滴加20ul经处理后的文物样，在1‑5℃冰箱里包被过夜，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3‑5遍，电极1，2上滴加28‑32ul的1wt%牛血清蛋白，室温孵育1‑3h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3‑5遍；M)取步骤E）所得的5µl浓缩液分别滴加至经步骤L)中处理的电极1，2上，在室温下孵育0.5‑1.5h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3‑5遍，晾干；N)将步骤M）中处理的电极置于含有0.1M过硫酸钾和0.1M氯化钾的PBS 7.4缓冲液中进行电化学扫描，得到电化学发光信号；若两电极均有发光信号，则判定文物样中有羊毛，若只有电极1有发光信号，则判定文物样中无羊毛。
所属类别：	发明专利