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原文传递一种检测PS外泌体的生物传感器及其制备方法

专利名称：	一种检测PS外泌体的生物传感器及其制备方法
摘要：	本发明提供了一种磷酯酰丝氨酸(PS)外泌体的生物传感器及其制备方法。本发明以PS特异性识别肽作为识别元件，识别肽组装的生物传感电极作为捕获基底，由g‑C3N4纳米片、鲁米诺‑AuNPs和识别肽组成的电致化学发光探针作为信号探针。用捕获基底和信号探针特异性识别样品中的PS外泌体，形成三明治结构，通过信号探针产生检测信号。PS识别肽可特异性与肿瘤源外泌体上的PS结合，所述PS识别肽结构简单，亲和力和选择性高，不易受pH、温度等环境因素影响，稳定性好。本发明可实现高灵敏度和高选择性的PS外泌体检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京化工大学
发明人：	陈旭;刘雪娇;杨文胜
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910746802.X
公开号：	CN110456055A
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100029北京市朝阳区北三环东路15号
主权项：	1.一种检测磷酯酰丝氨酸(PS)阳性外泌体的生物传感器，其特征在：以PS特异性识别肽作为识别元件，识别肽组装的生物传感电极作为捕获基底，由g-C3N4纳米片、鲁米诺-AuNPs和识别肽组成的电致化学发光探针作为信号探针。 2.根据权利要求1所述的PS特异性识别肽，其特征在于：氨基酸序列为FNFRLKAGAKIRFGRGC，序列中下划线部分为PS特异性识别序列，RGC为键连序列，末端半胱氨酸C中的巯基可以与金结合。 3.根据权利要求1所述的捕获基底，其制备方法特征在于：以氯金酸溶液为电沉积底液，玻碳电极为工作电极，采用恒电位沉积方法，制备出AuNPs修饰的玻碳电极，进一步用去离子水冲洗、室温晾干后，将修饰电极浸入识别肽溶液中进行孵育并冲洗；随后再将修饰电极浸入牛血清蛋白中进行封闭，得到识别肽组装的生物传感电极。 4.根据权利要求3所述的捕获基底制备方法中，所述氯金酸溶液的质量分数为1%，恒电位沉积的电压为- 0.2 V，沉积时间为10～30 s；所述识别肽水溶液的浓度为0.2～1 μM，在4 ℃孵育0.5～12 h；牛血清蛋白水溶液的质量分数为0.2%～1%，在4 ℃下孵育0.5～1 h。 5.根据权利要求1所述的信号探针，其制备方法特征在于：将g-C3N4纳米片和鲁米诺-AuNPs混合均匀后，搅拌，然后以6000 rpm离心30分钟除去上清得到鲁米诺-AuNPs@g-C3N4沉淀物，将得到的鲁米诺-AuNPs@g-C3N4沉淀物与识别肽通过巯基与金配位作用形成Au-S键进行结合即可得到鲁米诺-AuNPs@g-C3N4/识别肽信号探针。 6.根据权利要求5所述的信号探针制备方法中，所述g-C3N4纳米片和鲁米诺-AuNPs溶液的投料比例为(0.5～1) mg：(0.5～10) mL；室温下搅拌18～36 h；所述鲁米诺-AuNPs@g-C3N4沉淀物与识别肽结合温度为4～40 ℃，时间为6～10 h。 7.一种检测PS外泌体生物传感器的测试方法，其特征是，将待测外泌体溶液在权利要求1或3所述的生物传感电极上孵育，使PS阳性外泌体捕获在生物传感器电极上，随后将权利要求1或5所述的鲁米诺-AuNPs@g-C3N4/识别肽信号探针溶液在捕获有PS阳性外泌体的生物传感器电极上孵育，使探针结合在生物传感器电极的PS阳性外泌体上，从而组成信号探针和生物传感器电极夹载PS外泌体的识别肽基三明治型生物传感器，对该电致化学发光生物传感器在含过氧化氢(H2O2)的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中进行检测，通过信号探针产生电致化学发光信号，从而指示PS外泌体的含量。
所属类别：	发明专利