详情

原文传递四味珍层冰硼滴眼液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱

专利名称：	四味珍层冰硼滴眼液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
摘要：	本发明公开的四味珍层冰硼滴眼液指纹图谱的建立方法及指纹图谱，属于中药分析技术领域，本发明方法采用高效液相色法，色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流速：0.3～0.8mL/min；柱温：20～40℃；检测波长：200～240 nm；流动相采用梯度洗脱，A相：0.08～0.12%TFA‑水，B相：60～80%乙腈水溶液‑0.08～0.1%TFA水，采梯度洗脱方式，得到四味珍层冰硼滴眼液的指纹图谱。本发明的指纹图谱能全面表征四味珍层冰硼滴眼液的质量信息，从而可以更加全面有效地控制四味珍层冰硼滴眼液的质量，为该中药制剂生产和质量控制提供科学依据。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江西;36
申请人：	江西珍视明药业有限公司
发明人：	黄志元;曹征宇;刘蒙;龚楚良;饶礽;饶珍;朱样根
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910920989.0
公开号：	CN110470779A
代理机构：	南昌新天下专利商标代理有限公司
代理人：	胡山
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	344000 江西省抚州市临川区迎宾大道218号
主权项：	1.一种四味珍层冰硼滴眼液指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，具体包括如下步骤：（1）对照品溶液的制备：称取对照品适量，加水溶解并等倍稀释制成对照品储备液；（2）供试品溶液的制备：分别吸取各批次四味珍层冰硼滴眼液1.0～2.0mL，10,000～15,000 r/min2～6℃离心10～20 min，取上清备用，2～6℃冷藏，得到供试品溶液；（3）色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为水、乙腈和TFA组成的梯度洗脱液；采用梯度其中：A相，0.08%-0.12% TFA-水；B相，60-80%乙腈水溶液-0.08% -0.1%TFA水；流速：0.3～0.8 mL/min；柱温：20～40℃；检测波长：200～240 nm；（4）测定：吸取供试品溶液10～30μL注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。 2.根据权利要求1所述的一种四味珍层冰硼滴眼液指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤（2）中所述供试品溶液的制备：分别吸取各批次四味珍层冰硼滴眼液1.5mL，12,000 r/min4℃离心15 min，取上清备用，4℃冷藏；步骤（3）中所述色谱条件为：色谱柱： Agilent，Eclipse XDB-C18，3.0×150mm，3.5μm；采用梯度洗脱，流动相：A相，0.1% TFA-水；B相，70%乙腈水溶液-0.085% TFA水；流速：0.4 mL/min；柱温：30℃；检测波长：220 nm；步骤（4）中所述测定方法为精密吸取供试品溶液20μL注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。 3.根据权利要求2所述的一种四味珍层冰硼滴眼液指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤（3）色谱条件中所述的梯度洗脱，梯度洗脱程序以如下体积浓度配置进行： 0 min，流动相A为98%的0.1% TFA-水，流动相B为2%的乙腈水溶液-0.085% TFA水； 20 min，流动相A为98%的0.1% TFA-水，流动相B为2%的乙腈水溶液-0.085% TFA水； 60 min，流动相A为90%的0.1% TFA-水，流动相B为10%的乙腈水溶液-0.085% TFA水； 65 min，流动相A为90%的0.1% TFA-水，流动相B为10%的乙腈水溶液-0.085% TFA水； 70 min，流动相A为98%的0.1% TFA-水，流动相B为2%的乙腈水溶液-0.085% TFA水； 80 min，流动相A为98%的0.1% TFA-水，流动相B为2%的乙腈水溶液-0.085% TFA水；其中TFA水质量比为7:3。 4.根据1—3任一权利要求所述的一种四味珍层冰硼滴眼液指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述指纹图谱中有9个特征共有峰，其中2号峰为L-酪氨酰甘氨酰甘氨酸，4号峰为L-酪氨酰甘氨酸，5号峰为L-酪氨酰甘氨酰甘氨酰甘氨酰甘氨酸，具体如下： 1号峰，平均保留时间为12.280min，峰面积为：77.008； 2号峰，平均保留时间为13.855min，峰面积为：241.530； 3号峰，平均保留时间为17.842min，峰面积为：88.588； 4号峰，平均保留时间为23.918min，峰面积为：89.861； 5号峰，平均保留时间为30.421min，峰面积为：59.534； 6号峰，平均保留时间为59.814min，峰面积为：266.571； 7号峰，平均保留时间为25.769min，峰面积为：65.096； 8号峰，平均保留时间为27.892min，峰面积为：62.182； 9号峰，平均保留时间为39.431min，峰面积为：87.837； 9个共有峰的保留时间RSD在0.58%～1.88%。 5.根据1—4任意一项权利要求所述的方法制得的指纹图谱在珍珠层粉药材及珍珠层粉提取液药材和制剂检测中的应用。 6.根据权利要求5所述的方法制得的指纹图谱在珍珠层粉药材及珍珠层粉提取液药材和制剂检测中的应用，其特征在于，建立了四味珍层冰硼滴眼液高效液相色谱指纹图谱的方法，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备：称取对照品适量，加水溶解并等倍稀释制成对照品储备液；（2）供试品溶液的制备：分别吸取各批次珍珠层粉水解液1.5mL，12,000 r/min 4℃离心15 min，取上清备用，4℃冷藏；（3）高效液相色谱分析：色谱柱采用Agilent，Eclipse XDB-C18；采用梯度洗脱，A相为0.1% TFA-水，B相为70%乙腈水溶液-0.085% TFA水；流速为0.4 mL/min；柱温为30℃；检测波长为220 nm，进样量为20μL，进行梯度洗脱：在此条件下进行HPLC分析，得到四味珍层冰硼滴眼液指纹图谱；（4）标准指纹图谱的确定：按照本发明提供的方法，对不同批号的14批四味珍层冰硼滴眼液建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了9个共有特征峰，计算各共有特征峰的保留时间，其平均值为：12.280（峰1）、13.855（峰2）、17.842（峰3）、23.918（峰4）、30.421（峰5）、59.814（峰6）、25.769（峰7）、27.892（峰8）、39.431（峰9）；依上述色谱方法测定了14份不同批号的四味珍层冰硼滴眼液HPLC指纹图谱，采用国家药典委员会颁布的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》软件导入14 批次四味珍层冰硼滴眼液HPLC指纹图谱数据，设定S8（批号150112）为参照图谱，选取“时间窗宽度”为0.20min，选定2个峰面积相对较大的峰进行多点校正，自动匹配，以中位数法生成对照图谱，并建立14批四味珍层冰硼滴眼液HPLC指纹图谱色谱叠加图；（5）相似度评价：四味珍层冰硼滴眼液样品S1-S14与对照指纹图谱R的相似度均大于0.800，即四味珍层冰硼滴眼液各批次相似，质量稳定性较好，符合指纹图谱的要求。
所属类别：	发明专利