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原文传递一种高比表面纳米金作信号放大载体的电化学传感器的制备及其在农药联合毒性评价的应用

专利名称：	一种高比表面纳米金作信号放大载体的电化学传感器的制备及其在农药联合毒性评价的应用
摘要：	本发明属于生物传感技术领域，具体涉及一种高比表面纳米金作信号放大载体的电化学传感器的制备及其在农药联合毒性评价的应用，包括以下步骤：生长Au纳米种子，制备高比表面积纳米金材料，适体传感器的制备以及产生电化学信号。本发明保证了传感器的可靠性和稳定性；提高了对靶细胞的捕获效能；提高电子迁移速率；对毒死蜱的电信号识别能力显示出较高的水平，灵敏度高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江南大学
发明人：	李在均;彭源丰;李瑞怡;孙秀兰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910822796.1
公开号：	CN110455898A
代理机构：	无锡市大为专利商标事务所(普通合伙)
代理人：	曹祖良;夏苏娟
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	214122江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号
主权项：	1.一种高比表面纳米金作信号放大载体的电化学传感器的制备，其特征在于，包括以下步骤，（1）称取十六烷基三甲基氯化铵加入1-50mL去离子水中，调节十六烷基三甲基氯化铵浓度为0.1-1.0wt%，再加入0.1-5.0mL、1-30mM的HAuCl4水溶液，将反应液保持在20-50℃水浴中；然后加入5-100μL、0.1-5.0mM的KBr溶液，静置10-30min，随后加入5-100μL、0.1-5.0mM的KI溶液，再静置10-30min，继续加入100-800μL、5-100mM的L-抗坏血酸溶液后，静置30-60min以生长Au纳米种子；（2）将十六烷基三甲基氯化铵和0.1-5.0mL、1-30mM的HAuCl4加入到1-50mL去离子水中制备生长溶液，调节十六烷基三甲基氯化铵浓度为0.1-1.0wt%；向生长溶液中加入0.1-10.0μL、0.1-50mM的L-谷胱甘肽，倒置试管振荡混合均匀，然后加入1.0-100.0μL步骤（1）所得 Au纳米种子溶液，振荡混匀；将溶液置于20-50℃水浴中30-60min后离心富集，洗涤1-3次，得到的高比表面积纳米金材料分散在3-5mL超纯水中；（3）将玻碳电极浸入刻蚀液中5-20分钟，然后用氧化铝浆料将玻碳电极抛光至镜面状表面，依次在水、乙醇、水中经超声波清洗玻碳电极1-3min，清洁后的玻碳电极在0.1-2.0M的H2SO4溶液中进一步电化学活化，再用超纯水冲洗并用N2干燥；（4）将1-25μL、0.1-10.0μM的DNA适体滴在步骤（3）处理所得玻碳电极表面，0-20℃温育过夜，然后用去离子水洗涤以除去未结合的DNA适体；滴加5-10μL步骤（2）所得高比表面积纳米金材料溶液，高比表面积纳米金材料通过Au-S键固定在玻碳电极上形成适体传感器；（5）将适体传感器与pH为6.0-8.0、含浓度0.05-0.25M的HepG-2细胞的PBS溶液在20-50℃温育1-5小时以捕获HepG-2细胞形成夹心状结构，然后用PBS洗涤1-3次，制得电化学适体传感器。 2.如权利要求1所述的高比表面纳米金作信号放大载体的电化学传感器的制备，其特征在于，所述步骤（3）中的刻蚀液采用H2SO4:30％H2O2= 3:1刻蚀液。 3.如权利要求1所述的高比表面纳米金作信号放大载体的电化学传感器的制备，其特征在于，所述步骤（4）中所得适体传感器在使用前储存在0-8℃的冰箱中。 4.如权利要求1所述的基于高比表面积纳米金材料作为信号放大DNA载体的电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）中所得电化学适体传感器在电化学检测中置于0.1-10mL含有0.1-10.0mM的氢醌和0.1-10.0mM的H2O2的PBS溶液中。 5.一种高比表面纳米金作信号放大载体的电化学传感器在农药联合毒性评价的应用，其特征在于，用于毒死蜱的检测，所述电化学传感器为采用如权利要求1-3任一所述制备方法制得的电化学适体传感器，包括以下步骤：将5μL毒死蜱标准溶液或样品溶液滴加到所述电化学传感器的表面上，30-40℃温育1-2小时，用PBS洗涤并用N2干燥；将电化学传感器浸入入pH 7.4、10mM的磷酸缓冲盐溶液中，采用差分脉冲伏安法测量，设定脉冲幅度50Mv，记录在-0.3V和0.5V之间的差分脉冲伏安曲线。 6.一种高比表面纳米金作信号放大载体的电化学传感器在农药联合毒性评价的应用，其特征在于，用于二元有机磷农药在细胞水平上的联合毒性评价，所述电化学传感器为采用如权利要求1-3任一所述制备方法制得的电化学适体传感器，包括以下步骤：取处理后的生长至对数期的HepG-2细胞，向其中加入以浓度比为1:1配制的毒死蜱和克百威混合溶液，不同浓度的毒死蜱和克百威在使用前用丙酮稀释，再加入细胞培养基配制至所需浓度，且保持丙酮的体积浓度低于0.5%，并以含0.5%体积浓度丙酮的细胞基作为实验的对照组；调整加入毒死蜱和克百威混合溶液的浓度，测试电化学传感器的差分脉冲伏安响应。
所属类别：	发明专利